茵衣藻是一種模型綠色微藻,能夠利用醋酸異養(yǎng)生長(zhǎng)。盡管含有完整的β氧化基因,但不能在脂肪酸上生長(zhǎng)。最近的報(bào)道表明,藻類(lèi)優(yōu)先隔離而不是分解脂酰鏈,來(lái)用作快速重建膜。我們收集了一系列過(guò)氧化物酶體生物發(fā)生所需的潛在衣藻過(guò)氧化物素(PEXs),以表明萊茵衣藻具有一套完整的過(guò)氧化物酶體生物發(fā)生因子。為了確定過(guò)氧化物酶體參與外源性脂肪酸的代謝,我們檢測(cè)了在不同營(yíng)養(yǎng)條件下表達(dá)與過(guò)氧化物酶體蛋白N端或c端肽融合的熒光蛋白,同時(shí)加入熒光標(biāo)記的棕櫚酸。在光照和黑暗,有或者沒(méi)有乙酸作為碳源的條件下,使用共聚焦顯微鏡跟蹤過(guò)氧化物酶體。在細(xì)胞中,鑒定了四個(gè)主要的隔間,包括: (1)乙醛酸循環(huán)酶標(biāo)記和含有過(guò)氧化物酶體靶向信號(hào)1(PTS1)三肽但缺乏脂肪酸標(biāo)記,(2)脂肪酸標(biāo)記,(3)乙醛酸循環(huán)酶標(biāo)記,(4)PTS1標(biāo)記。不到5%的隔間同時(shí)含有脂肪酸和過(guò)氧化物酶體標(biāo)記物。對(duì)光學(xué)切片圖像的統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn),萊茵衣藻在細(xì)胞中同時(shí)攜帶不同的過(guò)氧化物酶體群體,并根據(jù)光照條件調(diào)節(jié)過(guò)氧化物酶體的含量。另一方面,無(wú)論培養(yǎng)條件如何,同時(shí)含有脂肪酸和過(guò)氧化物酶體標(biāo)記物的隔室的比例都沒(méi)有顯著變化。結(jié)果表明,β-氧化在萊茵衣藻的過(guò)氧化物酶體群體中可能發(fā)生率較小,這支持了藻類(lèi)中脂肪酸的主要代謝偏好是脂質(zhì)生物合成而不是β-氧化的觀點(diǎn)。
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近年來(lái),南美白對(duì)蝦早期死亡綜合癥(EMS)一直困擾著整個(gè)對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè),“EMS”還是導(dǎo)致對(duì)蝦養(yǎng)殖早期高死亡率、高排塘率的主要原因。對(duì)蝦的“EMS”與藻毒素有著千絲萬(wàn)縷的聯(lián)系,采取切實(shí)可行的措施,控制好藻毒素,才是減少對(duì)蝦早期死亡綜合癥的主要途經(jīng)。
藻類(lèi)對(duì)南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖的影響:
1.藻類(lèi)都具有產(chǎn)氧功能,也包括令養(yǎng)蝦戶頭疼的藍(lán)藻。當(dāng)前最大的問(wèn)題是,當(dāng)單一藻類(lèi)大量繁殖時(shí),會(huì)釋放出藻毒素,直接導(dǎo)致水體溶氧迅速降低,造成的南美白蝦的應(yīng)激性反應(yīng)。當(dāng)出現(xiàn)單一藻類(lèi)大量繁殖的情況時(shí),需要引起我們的重視。
2.在眾多藻類(lèi)毒素中,藍(lán)藻微囊藻毒素對(duì)白對(duì)蝦肝胰臟的損傷是不容置疑的,同時(shí)也是造成南美白對(duì)蝦肝胰腺壞死、腸炎、偷死的主要原因之一。水中藻類(lèi)問(wèn)題導(dǎo)致對(duì)蝦大量死亡的現(xiàn)象也時(shí)有發(fā)生,對(duì)水中藻類(lèi)的控制已經(jīng)成為水質(zhì)管理的重點(diǎn)之一。
藻毒素產(chǎn)生的原因:
1、水體富營(yíng)養(yǎng)化是藻毒素發(fā)生的物質(zhì)基礎(chǔ)和首要條件,養(yǎng)殖水質(zhì)自身污染也是誘發(fā)有害藻類(lèi)大量繁殖的原因之一。
2、倒藻影響。倒藻出現(xiàn)時(shí)會(huì)導(dǎo)致水色驟然變清、變濁、甚至變紅。發(fā)生“倒藻”時(shí),首先溶解氧會(huì)下降,二氧化碳會(huì)增加,pH值迅速下降;其次大量的死藻分解,會(huì)加大耗氧,還會(huì)產(chǎn)生氨氮和亞硝酸鹽;水中的原生物會(huì)大量繁殖,直接導(dǎo)致對(duì)蝦藻類(lèi)毒素中毒、缺氧、發(fā)病、死亡。
如何控制藻毒素過(guò)度繁殖:
1.做好肥水育藻是最關(guān)鍵的第一步。改變傳統(tǒng)的肥水方式,少施有機(jī)肥,合理施用生物肥,主動(dòng)控制少藻和不倒藻。
2.堅(jiān)持“以菌養(yǎng)藻”。定期投放有益微生物制劑,如光合細(xì)菌、EM菌、乳酸菌、芽孢桿菌,通過(guò)生態(tài)競(jìng)爭(zhēng),降解進(jìn)入水體中的有機(jī)耗氧,凈化水質(zhì),平衡藻相和菌相。
3.提高底部溶解氧。溶解氧是評(píng)價(jià)水質(zhì)穩(wěn)定的重要標(biāo)準(zhǔn),在對(duì)蝦養(yǎng)殖中后期增大溶氧量,尤其是凌晨池水溶解氧為最低時(shí),是常見(jiàn)的降低水體氨氮、亞硝酸鹽含量的有效措施。
堅(jiān)持使用膽汁酸拌料,雖然現(xiàn)在藻毒素?zé)o藥可徹底降解,但我們可以通過(guò)拌料使用膽汁酸起到促進(jìn)對(duì)蝦肝胰腺排毒解毒的作用,同時(shí)強(qiáng)健對(duì)蝦肝胰腺功能,提高對(duì)蝦體質(zhì),預(yù)防因藻毒素引起的腸炎、偷死、白便等肝胰腺疾病。
有害藻的大量生長(zhǎng)說(shuō)明水環(huán)境已經(jīng)出現(xiàn)問(wèn)題,因此對(duì)不同的有害藻類(lèi)的不同時(shí)期可采用不同的方案進(jìn)行處理,但對(duì)于毒性比較大的藻類(lèi),換水還是最佳選擇??刂茖?duì)蝦藻毒綜合癥,是對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展的重要舉措。
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產(chǎn)品分類(lèi)液體菌劑以有機(jī)、無(wú)機(jī)原料培養(yǎng)液接種光合細(xì)菌,經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)而成的光合細(xì)菌菌液。
固體菌劑由某種固體物質(zhì)作為載體吸附光合細(xì)菌菌液而成。
施用方法生產(chǎn)的光合細(xì)菌肥料一般為液體菌液,用于農(nóng)作物的基肥、追肥、拌種、葉面噴施、秧菌蘸根等。
作種肥使用,可增加生物固氮作用,提高根際固氮效應(yīng),增進(jìn)土壤肥力。
葉面噴施,可改善植物營(yíng)養(yǎng),增強(qiáng)植物生理功能和抗病能力,從而起到增產(chǎn)和改善品質(zhì)的作用。
作果蔬保鮮劑,能抑制病菌引起的病害,對(duì)西瓜等的保存有良好的作用。光合細(xì)菌防止病害的主要原因是因?yàn)樗哂袣⒕饔?,能抑制其他有害菌群及病毒的生長(zhǎng)。
此外,在畜牧業(yè)上應(yīng)用于飼料添加劑,畜禽糞便的除臭,有機(jī)廢棄物的處理上均有較好的應(yīng)用前景。
由于光合細(xì)菌應(yīng)用歷史比較短,許多方面的應(yīng)用研究還處在初級(jí)階段,還有大量的、深入的研究工作要做。尤其是這一產(chǎn)品的質(zhì)量、標(biāo)準(zhǔn)以及進(jìn)一步提高應(yīng)用效果等方面基礎(chǔ)薄弱,有待進(jìn)一步加強(qiáng)。目前的研究和試驗(yàn)已顯示出光合細(xì)菌作為重要的微生物資源,其開(kāi)發(fā)應(yīng)用的前景是廣闊的,必將具有不可替代的應(yīng)用市場(chǎng),在人類(lèi)活動(dòng)中必將發(fā)揮越來(lái)越大的作用。
光合細(xì)菌簡(jiǎn)稱PSB是在厭氧條件下, 能夠進(jìn)行不放氧光合作用的一類(lèi)細(xì)菌的總稱。屬于水圈微生物的一種, 廣泛分布于水田、池塘及江河湖海中,尤其在有機(jī)物污染的積水(如糞便、堆肥污水等)處較多。光合細(xì)菌包括綠硫細(xì)菌、紅硫細(xì)菌、紅螺菌三個(gè)科, 其中紅螺科的一些屬(如紅假單胞屬)能在厭氧光照、好氧黑暗條件下迅速利用低分子有機(jī)物, 故可用來(lái)處理有機(jī)廢水。
2.研究概況
自60年代起, 日本小林正泰等首先進(jìn)行了用PSB菌處理有機(jī)廢水方面的研究, 先后成功地利用光合細(xì)菌對(duì)糞尿、食品行業(yè)污水、淀粉生產(chǎn)污水、皮革及以豆制品生產(chǎn)中所產(chǎn)生的有機(jī)廢水進(jìn)行了處理, 取得了成功的經(jīng)驗(yàn)。近年來(lái)中國(guó)也已對(duì)高合成脂肪廢水、豆制品、洗毛廢水及檸檬酸、味精等中、高濃度廢水進(jìn)行了研究和成功運(yùn)作。而且不僅采用PSB占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)的活性污泥法, 同時(shí)采用制用載體進(jìn)行接觸氧化法的運(yùn)作也取得了較大的成功。在利用PSB處理高濃度廢水如味精廢水經(jīng)過(guò)三段接觸氧化法, 利用PSB菌群, 將COD從幾萬(wàn)降至2-3千mg/L不僅突破了傳統(tǒng)的采用厭氧處理后才能將COD從幾萬(wàn)降至幾千的做法, 同時(shí)將作為一種優(yōu)勢(shì)菌與其它優(yōu)勢(shì)菌結(jié)合, 可以廣泛應(yīng)用在食品、印染、制革、造紙等具有可生化性能的污水處理上。
3.PSB處理有機(jī)廢水的原理
從廢水中分離出來(lái)的PSB是紅螺菌科的一些細(xì)菌種, 其細(xì)胞可進(jìn)行光合磷酸化和光氧化還原反應(yīng), 在好氧黑暗條件下, 紅螺菌缺少這種載色體, 此時(shí)它通過(guò)三梭酸循環(huán)來(lái)進(jìn)行有機(jī)酸代謝, 但當(dāng)轉(zhuǎn)變成厭氧光照時(shí)又很快形成載色體。這種隨生長(zhǎng)條件變化而靈活地改變代謝類(lèi)型的特性, 使PSB在厭氧光照、黑暗好氧、明亮好氧的條件下均可降解有機(jī)物, 而且它所要求的條件也不像一般的專屬好氧菌和專屬厭氧菌那樣嚴(yán)格。由于在好氧條件下產(chǎn)酸的速率明顯高于厭氧產(chǎn)酸的發(fā)酵的速率, 且PSB生長(zhǎng)較快, 分解能力較大, 故在好氧設(shè)施使用PSB降解有機(jī)物更為有利, 它不僅比單一的專屬細(xì)菌具有較高生長(zhǎng)率, 同時(shí)在不同環(huán)境條件下都能發(fā)揮其特殊的作用。對(duì)于酸化水解工藝加上好氧曝氣處理有機(jī)廢水來(lái)源, 通過(guò)兼性厭氧菌的作用將長(zhǎng)鏈有機(jī)物轉(zhuǎn)化成低級(jí)脂肪酸等小分子有機(jī)物, 再在好氧條件下, PSB生物降解有機(jī)物的能力比常規(guī)的好氧菌具有較高的處理效率, 它將使好氧生化池的容積大幅度減小, 降低工程投資, 具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。
PSB與其它菌種共同生存時(shí)同樣具有較高的優(yōu)勢(shì)。在自然水體中紅螺菌是與其它養(yǎng)菌共生的, 而且有機(jī)物越多的地方如魚(yú)塘、沼澤、淤泥堆積等地,紅螺菌會(huì)更多, 因此只要廢水中的水質(zhì)、溶解氧、停留時(shí)間合適, 光合細(xì)菌就會(huì)保持一定的優(yōu)勢(shì)生長(zhǎng), 在生化反應(yīng)池中的微生物菌群與降解過(guò)程中相應(yīng)的微生物菌群交替演繹使得生物降解在更高的狀態(tài)下進(jìn)行。因此, 只要投加的菌種是生物降解所必需的, 或能協(xié)同降解有機(jī)物的微生物, 均可使PSB菌處于一種高效的狀態(tài), 提高處理效果。
4.處理有機(jī)廢水的特點(diǎn)
a、處理中低濃度的廢水時(shí), 同樣具有處理高濃度有機(jī)廢水的特點(diǎn),BOD 負(fù)荷高??筛哌_(dá)5kg/m3·d以上, 同時(shí)由于投加了其它菌種, 同樣具有一般接觸氧化法的特點(diǎn), 出水BOD很低。
b、耐沖擊負(fù)荷,BOD 負(fù)荷大幅變化, 出水處理效果不受影響。
c、重新運(yùn)行靈活
在將PSB菌進(jìn)行接觸氧化法時(shí), 不需污泥回流, 吸附在載體上時(shí), PSB菌種生長(zhǎng)性能好, 重新檢修時(shí), 恢復(fù)正常運(yùn)行啟動(dòng)較快。
e、PSB耐高鹽分, 是一種可降解油脂、脫硫、脫氮、脫磷的廣譜細(xì)菌, 在和不同的細(xì)菌協(xié)同作用下,可以處理多種有機(jī)廢水。
f、對(duì)溫度變化不敏感, 在低溫狀態(tài)下, 仍然能達(dá)到一定的處理效果。
g、污泥量少, 易于分離。作用于載體上時(shí), 污泥量比單純的活性污泥法的污泥產(chǎn)量大幅度減少。
5.結(jié)論
光合細(xì)菌在污水處理中, 能有效地提高處理效率, 它不僅對(duì)高濃度有機(jī)廢水水質(zhì)具有良好的處理效果, 而且與其它優(yōu)勢(shì)菌協(xié)同處理低濃度廢水時(shí)同樣能取得較理想的效果, 而且能降低基建投資, 減少運(yùn)行成本。是具有實(shí)用價(jià)值的處理方式。
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2.?在種植業(yè)上的應(yīng)用。PSB作為微生物肥料增強(qiáng)作物的光合作用,改良土壤,提高作物的固氮能力,促進(jìn)生根、花芽形成、果實(shí)膨大和作物早熟,提高作物抗毒、抗病能力。此項(xiàng)應(yīng)用一般用清水稀釋20倍后,噴灑葉面、噴灌滴灌、澆根、浸根均可。
3.?污水、垃圾的凈化和除臭。在養(yǎng)殖中,由于密度大,大量的飼料投喂和動(dòng)物糞便的排泄,加上其他工業(yè)、居民生產(chǎn)生活也產(chǎn)生高濃度的廢水,給環(huán)境造成極大負(fù)擔(dān)。PSB處理污水效果好,連續(xù)投放三次,間隔一周,每次每畝投放20升,可以達(dá)到污水綜合排放標(biāo)準(zhǔn)。垃圾除臭采用噴灑處理。
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光合細(xì)菌
光合細(xì)菌適宜生長(zhǎng)在15℃—40℃的環(huán)境中,有半環(huán)狀、桿狀、球狀、螺旋狀等多種形態(tài)。光合細(xì)菌雖不含葉綠體,但含有類(lèi)似葉綠體的結(jié)構(gòu),在此結(jié)構(gòu)中有葉綠素、菌綠素、輔助色素類(lèi)胡蘿卜素和藻膽素等細(xì)菌光合色素,這些色素是光合細(xì)菌進(jìn)行光合作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。
光合細(xì)菌菌體無(wú)毒且營(yíng)養(yǎng)豐富,含有65.45%蛋白質(zhì),7.18%脂肪,2.78%粗纖維和20.31%可溶性糖。PSB菌體還含有豐富的B族微生物(其中維生素B12含量是酵母的200倍)和16種人體必需氨基酸、泛酸、葉酸等。除此之外,還含有抗病毒物質(zhì)、促生長(zhǎng)因子和輔酶Q等多種生理活性物質(zhì),尤其是輔酶Q含量分別為酵母、菠菜葉和玉米幼芽的13倍、94倍和82倍。光合細(xì)菌也因此被開(kāi)發(fā)成多種保健食品。據(jù)美國(guó)商務(wù)部透露,僅1992年, 美國(guó)保健品中約有5.5% ~ 6.5%的品種加有不同比重的光合細(xì)菌菌液;日本生物化學(xué)工業(yè)公司生產(chǎn)的一種紫色光合細(xì)菌保健食品還申請(qǐng)了專利。
由于以煤焦油系為主要成分的合成色素具有致癌性,天然色素的開(kāi)發(fā)引起了廣泛關(guān)注。光合細(xì)菌含有的類(lèi)胡蘿卜素是一種用途非常廣泛的功能色素,在用作食品添加劑的同時(shí)還可起到抗氧化的保健作用。采用光合細(xì)菌發(fā)酵生產(chǎn)的類(lèi)胡蘿卜素?zé)o毒、色彩鮮艷,目前已被廣泛應(yīng)用于油脂類(lèi)、豆制品、冰淇淋、糕點(diǎn)以及飲料等的著色。
此外,光合細(xì)菌還可作為優(yōu)良的水質(zhì)改良劑和飼料添加劑應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖和畜禽飼養(yǎng)上。
The post 一種有益的微生物——光合細(xì)菌 first appeared on 上海光語(yǔ)生物科技有限公司.]]>上海光語(yǔ)生物科技有限公司提供的光合細(xì)菌培養(yǎng)設(shè)備和技術(shù),可以幫助企業(yè)獲得純正的光合菌,而不是市面買(mǎi)來(lái)的攙和了色素的偽劣產(chǎn)品。歡迎來(lái)電咨詢。
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其中,①5%NaHCO3水溶液,過(guò)濾除菌取2m1加入無(wú)菌培養(yǎng)基中。②生長(zhǎng)因子:維生素B10.001mg、乙尼克丁酸0.1mg、對(duì)氨基苯甲酸0.1mg、生物素0.001mg,以上藥品溶于蒸餾水中,定容至10ml,然后過(guò)濾除菌。③微量元素溶液:FeCl3·6H2O?:5mg;CuS04·5H2O:0.05mg;H3BO4lmg;MnCl2·4H2O:0.05mg;ZnSO4·7H2O:1mg;Co(NO3)2·6H2O:?0.5mg。以上藥品分別溶于蒸餾水中,并定容至1000m1。
除①、②、③外,各成分溶解后100?Pa滅菌20min。然后分別加入①、②、③,如加入0.1%~0.3%的蛋白胨則能促進(jìn)該菌生長(zhǎng)。
2、分離培養(yǎng)基:
傳統(tǒng)的紅螺科分離培養(yǎng)基的配方為:NH4Cl:0.1g;?MgCl2:0.02g;?酵母膏:0.01g;?K2HPO4:0.05g;?NaCl:?0.2g;?瓊脂2g,蒸餾水90ml。100Pa滅菌20min。
滅菌后,無(wú)菌操作加入經(jīng)過(guò)濾除菌的0.5g/5mlNaHCO3,再無(wú)菌加入過(guò)濾除菌的0.1g或0.1mlNa2S·9H2O(降低培養(yǎng)基的氧化還原值),最后再加入5ml經(jīng)過(guò)濾除菌的乙醇、戊醇或4%丙氨酸。用過(guò)濾滅菌的0.1mol/H3PO3調(diào)pH至7.0。
3、篩選富集培養(yǎng)基
? ? ? ? ? ?NH4Cl?1g/L,?NaHCO3?1g/L,?CH3COONa?3g/L,?KH2PO4?0.3g/L,?MgSO4?0.1g/L,?酵母膏0.5g/L,?微量元素母液1g,?自然pH值。擴(kuò)大培養(yǎng)培養(yǎng)基以海水代替微量元素母液。1000~4000lx光照,?(30±2)℃恒溫培養(yǎng)。
參考文獻(xiàn):固定化海洋光合細(xì)菌處理生活污水的研究*???黃寶興,李蘭生,趙亮,張微,唐迎迎????海洋湖沼通報(bào)
4、基礎(chǔ)培養(yǎng)基
NH4Cl:1g;?Na2HPO4:?0.5g;?MgSO4:?0.2g;?NaCl:?2g;?NaHCO3:?5g;?酵母膏:2g?;?乙醇2ml,用?0.1N?H3PO4調(diào)至pH7.0。
劃線培養(yǎng)基:采用固體瓊脂培養(yǎng)基,即在基礎(chǔ)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加1.0%的瓊脂。
以上培養(yǎng)基初始pH值均用H3PO4調(diào)至7.0,經(jīng)121℃滅菌30分鐘,NaHCO3過(guò)濾除
菌后加入。培養(yǎng)條件:光照培養(yǎng)箱溫度控制在30℃、光照強(qiáng)度控制在?3000uE.m-2s-1培養(yǎng)。
光合細(xì)菌是一種兼性嫌氣細(xì)菌,需要深層培養(yǎng)或在真空干燥器內(nèi)達(dá)到嫌氣或半嫌氣狀態(tài),一般將混合菌放入培養(yǎng)液中先富集再分離。具體方法:將混合菌裝入?10ml試管中,加入培養(yǎng)液充滿至刻度,蓋上膠塞,在光照條件下保持在30℃左右培養(yǎng)。待培養(yǎng)液出現(xiàn)紅色后,取培養(yǎng)液加1.5%的瓊脂,制成固體培養(yǎng)基,取菌液分別用無(wú)菌水以10-100000000倍稀釋,分別取lml樣本涂在平皿上,光照、30℃培養(yǎng)2d左右在平板上長(zhǎng)出菌落。移至平板采用劃線法進(jìn)行分離,將劃好線的平板倒置,在相同條件下培養(yǎng),反復(fù)分離純化,挑取不同特征的菌落,用斜面保存,純化分離后的菌種置于冰箱保存?zhèn)溆谩?/span>
PSB?培養(yǎng)中除碳、氮、磷等主要營(yíng)養(yǎng)元素外,還需要一定量的鎂、鈣、鈉和有關(guān)的微量元素,將所需的營(yíng)養(yǎng)元素按一定的比例配成適于菌體生長(zhǎng)繁殖的培養(yǎng)基。本實(shí)驗(yàn)室采用酵母膏、蛋白胨培養(yǎng)基,基本配方為:CaCl2?0.3g,MgSO4·7H2O?0.5g,酵母膏3g,蛋白胨3g,蒸餾水1000ml,pH:?6.8.?如需制固體培養(yǎng)基再加2%瓊脂。培養(yǎng)溫度:25℃~30℃最佳,光照強(qiáng)度:2000LX~5000LX,PH:7.5~8.5最佳。
把菌種接種到滅好菌的培養(yǎng)基中,在三角瓶中進(jìn)行二級(jí)培養(yǎng),每天搖晃幾次。把?40L?的反應(yīng)器中加滿自來(lái)水,放入通氣管,蓋上保鮮膜一起用次氯酸殺菌消毒24小時(shí),用硫代硫酸鈉(1L次氯酸需要150g硫代硫酸鈉)來(lái)中和。以15%的接種量接入反應(yīng)器中,用泵通氣培養(yǎng),用分光光度計(jì)跟蹤測(cè)量菌液的密度,得到菌液的密度較高,而且反應(yīng)器還可以進(jìn)一步放大。
5、細(xì)菌生長(zhǎng)培養(yǎng)基
NaCOOH3.0g.酵母膏3.0g,NH4CL2.0g,KH2PO4 0.5g,天然海水1000ml,高溫滅菌。
100ml具塞容量瓶中裝有50ml光合細(xì)菌培養(yǎng)基,按10%接種量接種母液(約每毫升10億個(gè)細(xì)胞)混合均勻后置于恒溫光照培養(yǎng)箱中光照厭氧培養(yǎng),光強(qiáng)2500Lux,溫度30攝氏度。
6、HCH光合細(xì)菌培養(yǎng)基
滅菌條件
(1)高壓蒸汽滅菌?小件玻璃器皿、培養(yǎng)基等采用濕式高壓蒸汽滅菌。這種滅菌方式可以達(dá)到徹底的滅菌。滅菌條件:0.103?MPa,120?℃,20min。
(2)紫外滅菌?無(wú)菌操作臺(tái)采用紫外滅菌方式,用紫外燈滅菌?30min。該種方式對(duì)空氣進(jìn)行滅菌。
光合細(xì)菌的純培養(yǎng)
本課題研究所用光合細(xì)菌為?Z08,除特殊說(shuō)明外,皆是由純培養(yǎng)獲得。將?50?mL?HCH?培養(yǎng)基灌裝于?250?mL?三角瓶,用封口膜將瓶口密封,以防止灰塵和雜菌進(jìn)入。灌裝好的培養(yǎng)基采用高壓蒸汽滅菌?20?min。待冷卻以后,在無(wú)菌操作臺(tái)中接種?OD660=1.0(干重?840?mg/L)的?Z08?15?mL。接種后將菌液放置在?140?rpm?的恒溫?fù)u床中培養(yǎng),控制溫度?30?℃,24?h?照明,照度?500—1000?lx,培養(yǎng)?48?h?達(dá)到穩(wěn)定期。培養(yǎng)后的光合細(xì)菌保存在?4℃條件下備用。
紅色非硫光合細(xì)菌富集培養(yǎng)基的配制:?NaHCO3?1.0?g;?NH4Cl?1?g;?K2HPO4??0.2?g;CH3COONa?1.0~5.0?g;MgSO4·7H2O?0.2?g;?NaCl?0.5~2.0?g;酵母浸汁0.1?g;微量元素10?mL。
將上述成分溶于蒸餾水中,調(diào)節(jié)pH至7.0,定容1000?mL。在115℃下滅菌20?min。
光合細(xì)菌的分離與培養(yǎng)
①?液體富集培養(yǎng)基:CH3COONa?3.0?g?,CH3CH2COONa?0.3?g,NaCl?1.0?g,(NH4)2SO4?0.3?g,MgSO4·7H2O?0.5?g,K2HPO4?0.7?g,CaCl2?0.05?g,MnSO4?0.0025?g,FeSO4?0.005?g,酵母膏?0.1?g,谷氨酸?1.0?g,蒸餾水定容至?1?L,調(diào)?pH?至?7.4。
②?固體分離培養(yǎng)基:CH3COONa?3.0?g·L-1,酵母膏?3.0?g·L-1,CaCl2?0.3?g·L-1,MgSO4·7H2O?0.5g·L-1,瓊脂?20?g·L-1,調(diào)?pH7.4。
培養(yǎng)條件:取少量活性污泥樣品于裝有?120?mL?富集培養(yǎng)基的?125?mL?血清瓶中富集,置于光照培養(yǎng)箱中?30?℃培養(yǎng),照度為?2000?1x。6~9?d?后,液體培養(yǎng)基變?yōu)榧t色,經(jīng)搖床振蕩稀釋處理后,涂布和劃線于平板固體培養(yǎng)基上,置于恒溫培養(yǎng)箱中黑暗好氧培養(yǎng),7?d?后獲得單菌落。在平板固體培養(yǎng)基中重復(fù)劃線?3?次以上,直到在顯微鏡下觀察為純菌。
7、RCVBN擴(kuò)大培養(yǎng)基
優(yōu)化培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)采用RCVBN擴(kuò)大培養(yǎng)基,其組成為:CH3COONa?3.0g,?(NH4)2SO4?1.0g,?MgSO4?0.2g,?NaCl?1.0g,?KH2PO4?0.3g,?K2HPO4?0.5g,?CaCl2?0.05g,?酵母膏0.1g,?微量元素溶液1mL,?蒸餾水1000mL.
微量元素溶液為改良的Imhoff和Truper生長(zhǎng)因子溶液,其組成為:?EDTA-2Na?2g,?FeSO4·7H2O?0.2g,?MnCl2·4H2O?0.1g,?H3BO3?0.1g,?CoCl2·6H2O?0.1g,?ZnCl2?0.1g,?Na2MoO4·2H2O?0.02g,?NiCl2·6H2O?0.02mg,?CuCl2·2H2O?0.01g,?蒸餾水1000mL。
培養(yǎng)方法
在8個(gè)CSTR光合培養(yǎng)器中進(jìn)行分批培養(yǎng),培養(yǎng)器體積為50?L。培養(yǎng)器光照根據(jù)強(qiáng)度不同的需要分別由三只25W,40W,60W,100W白熾燈泡組合提供,培養(yǎng)器的底部設(shè)有穿孔曝氣管,根據(jù)DO含量間歇開(kāi)啟,培養(yǎng)器內(nèi)設(shè)有溫控器。
8、光合細(xì)菌參考培養(yǎng)基
無(wú)水乙酸鈉5mg,氯化銨1.0mg,磷酸氫二鉀0.2mg,MgSO4·7H2O 0.2mg, 碳酸氫鈉1.0mg,酵母浸膏0.1mg,氯化鈉1.0mg調(diào)節(jié)pH為7.1-7.2, 1.05Mpa,121攝氏度滅菌20分鐘,固體培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基基礎(chǔ)上添加15-20%瓊脂
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光合細(xì)菌重點(diǎn)為厭氣性種類(lèi),也有少許屬于兼氣性品種,它們地都可以在「有光無(wú)氧」地環(huán)境下被培養(yǎng)。在這里面又分自營(yíng)性種類(lèi),及異營(yíng)性種類(lèi),所以不見(jiàn)得所有地光合細(xì)菌都適合應(yīng)用于水族缸作為凈水制劑。
已知在水族缸地好氣環(huán)境中,只有兼氣異營(yíng)性地光合細(xì)菌(如紅螺菌科菌種)最適合作為凈水制劑。它地培養(yǎng)物通常是少許有機(jī)營(yíng)養(yǎng)液,而且培養(yǎng)完成之后,可以直接填充瓶封為商品。此種商品一旦開(kāi)封之后,可以立即聞到一股惡臭,如果再加上顯色辨識(shí),應(yīng)該很容易確認(rèn)。
反觀硝化細(xì)菌均為好氣自營(yíng)性種類(lèi),在它地菌液中,通常不能含有任何易分解地有機(jī)成分,否則不僅會(huì)立即遭致異營(yíng)性細(xì)菌地污染,連瓶封環(huán)境中地有限氧氣,很快就會(huì)被耗盡,使得硝化細(xì)菌因缺乏氧氣而無(wú)法長(zhǎng)時(shí)間生存在這里面。因此,凡是硝化細(xì)菌制劑,應(yīng)該是沒(méi)有明顯地臭味地。
光合硝化細(xì)菌制劑的迷失
光合硝化細(xì)菌菌制=【光合細(xì)菌+硝化細(xì)菌】地混合制劑?這種產(chǎn)品既然命名為「光合硝化細(xì)菌」,難道真有這種細(xì)菌存在?非也,這應(yīng)該只是商品名稱吧!可能指這種產(chǎn)品相應(yīng)情況下具有光合細(xì)菌及硝化細(xì)菌地雙重作用地效果。不過(guò)在網(wǎng)絡(luò)上有眾多人認(rèn)為,它真是一種光合細(xì)菌與硝化細(xì)菌地混合制劑。
光合細(xì)菌與硝化細(xì)菌在生態(tài)上是二種完全獨(dú)立,而且互不隸屬地細(xì)菌,它們不僅能源獲得不同,連營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)及呼吸代謝也有所差異,實(shí)在很難想象這二類(lèi)細(xì)菌可以制成混合制劑,因此我們寧愿相信它只是商品名稱而已,而不必去過(guò)度濾揣測(cè),它是否為光合細(xì)菌與硝化細(xì)菌地混合制劑。
眾多光合細(xì)菌(重點(diǎn)是自營(yíng)性)對(duì)氮源地利用較廣,一般可利用銨鹽、氨氮,甚至氮?dú)?,少?shù)還能利用硝酸鹽和尿素。因此在功能上多少也具有類(lèi)似硝化細(xì)菌地除氨作用,也許因?yàn)槿绱?,聰明地生產(chǎn)廠家才把單純地光合細(xì)菌制劑以「光合硝化細(xì)菌」命名之,藉以增加銷(xiāo)路。不過(guò)相較于硝化細(xì)菌,這種產(chǎn)品地除氨效果不會(huì)較強(qiáng),應(yīng)該可以被理解地,蓋氨為硝化細(xì)菌地維生地能源(耗量多),而非像光合細(xì)菌只是營(yíng)養(yǎng)成分而已(耗量少)。
結(jié)論
優(yōu)良地水質(zhì)是成功養(yǎng)殖地先決條件,而健全地微生物凈水系統(tǒng)又是確保優(yōu)良地水質(zhì)地基礎(chǔ),所以對(duì)于如何建立有益微生物凈水系統(tǒng),已經(jīng)成為我們必須去努力追求地目標(biāo)。在這個(gè)創(chuàng)建地過(guò)程中,凡能選用優(yōu)良地微生物制劑,以協(xié)助既有地微生物凈水系統(tǒng)能發(fā)揮更強(qiáng)大地功能,將水中有害物質(zhì)徹除。