用固定液固定動(dòng)植物整體或它的一部分組織和氣管等,能保存組織內(nèi)細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)及其組成,盡量使它近于生活狀態(tài)。固定液一般有防腐和保存的作用,分為單純固定液和混合固定液。單純固定液中最重要的有乙醇、福爾馬林、醋酸、苦味酸、鉻酸、重鉻酸鉀、升汞等,前兩種固定液是中學(xué)生物實(shí)驗(yàn)室常用的。單純固定液的優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)便,缺點(diǎn)是有一定的局限性,不易達(dá)到理想的固定要求?;旌瞎潭ㄒ河袔追N不同的藥液按一定的比例混合而成,使各自的優(yōu)缺點(diǎn)相互補(bǔ)充,成為較完美的固定液。這種固定液的制備雖比較麻煩,但是效果比較好。常用的混合固定液是醋酸-酒精混合液、福爾馬林-醋酸-酒精液、包因氏固定液等。
常用的保存液大致跟固定液相同,主要是福爾馬林、酒精、甘油以及由這些藥物按比例配制成的各種混合液。有時(shí)按特殊保存的需要,再保存液中增加某些藥品(如原生標(biāo)本的保存液)。
1、福爾馬林
福爾馬林在固定組織標(biāo)本時(shí)殺菌能力強(qiáng),所以防腐性強(qiáng),滲透力大,固定得快。永福爾馬林固定精細(xì)的解剖標(biāo)本時(shí),要跟甘油、酒精、石炭酸等混合使用。
固定液常用的濃度是5~10%(根據(jù)材料的大小、性質(zhì)和數(shù)量而定)。
保存液常用的濃度是5~10%。用福爾馬林作保存液,效果好且價(jià)格低廉。
在配制福爾馬林溶液(固定液或保存液)時(shí),應(yīng)將37~40%的甲醛作為整個(gè)溶質(zhì)來配。例如配制5%福爾馬林是取市售37~40%甲醛溶液5毫升跟95毫升蒸餾水混合。實(shí)際上甲醛含量只有1.9~2%,這樣的配法已成為一般實(shí)驗(yàn)室常用的慣例。
注意事項(xiàng):
(1)福爾馬林業(yè)在長(zhǎng)期貯存中會(huì)產(chǎn)生蟻酸,可適量的加入碳酸鈣(?)或碳酸鎂(?)等堿性物質(zhì)進(jìn)行中和。
(2)福爾馬林業(yè)作為保存液會(huì)慢慢揮發(fā)而致使?jié)舛冉档停⑶腋栺R林液再保存中往往形成多聚甲醛,使浸液變濁,影響觀察。所以,根據(jù)一定保存期的情況,可適當(dāng)增加福爾馬林液的濃度或更換新液,以防標(biāo)本變壞。其中如有白色沉淀物,加熱后可使它溶解。
(3)市售的福爾馬林液常帶有酸性,能腐蝕石灰質(zhì),因此,最好不用福爾馬林液浸制有石灰質(zhì)外殼的動(dòng)物。
2、酒精(乙醇)
酒精也是常用的固定液,它有強(qiáng)烈的殺菌作用,對(duì)組織材料的滲透力較大,固定的快。但是,它的脫水作用較強(qiáng),在高濃度的酒精中容易使材料顯著硬化和收縮。一般用于固定浸制標(biāo)本材料,分一級(jí)或二級(jí)固定,即70%或50%與70%的酒精。有些小型材料或精細(xì)的解剖材料,最好用二級(jí)或三級(jí)固定,即用50%、70%或50%、60%、70%的酒精,最后再進(jìn)行保存。從經(jīng)濟(jì)效果來考慮,一般酒精應(yīng)跟福爾馬林液等固定液混合使用。
市售的工業(yè)用酒精濃度是95%左右,因此用時(shí)要重新配制。保存液的濃度通常是70%。
注意事項(xiàng):
(1)在固定材料時(shí)要注意固定的效果,小型材料一般放在固定液中固定。大型材料必須先往體內(nèi)注射一部分固定液,再放入固定液中,防止材料內(nèi)部腐懷變質(zhì)。用福爾馬林液固定也是如此。
(2)高濃度的酒精有脫水、脫脂作用。含有多量脂肪或擬脂標(biāo)本(如腦、脊髓)等都不宜用較高濃度的酒精作保存液。
(3)為了防止酒精使標(biāo)本硬化,保存一些精細(xì)的材料或解剖標(biāo)本時(shí),因加入少量甘油,因?yàn)楦视途哂袧?rùn)軟組織的作用。
(4)忌跟鉻酸、鋨酸和中鉻酸鉀等氧化劑配合。
3、醋酸
醋酸即乙酸,純醋酸在低于16.7攝氏度時(shí)會(huì)凝成冰狀固體,所以叫冰醋酸。醋酸能很快穿透組織,因?yàn)樗荒艹恋砑?xì)胞質(zhì)中的蛋白質(zhì),組織不會(huì)硬化。一般常跟酒精、福爾馬林、鉻酸等容易引起組織變硬和收縮的液體混合,以起到相互抵消的作用。
醋酸固定液的常用濃度是0.3%~5%。
4、苦味酸
苦味酸是一種黃色結(jié)晶,能溶于水(溶解度是0.9~1.2%)、酒精(溶解度是4.9%)和苯(溶解度是10%)。苦味酸也能沉淀一切蛋白質(zhì),穿透較慢,固定后,組織收縮明顯,但不使組織硬化。
苦味酸固定液可以在100毫升蒸餾水中加入苦味酸約1.5克,制成飽和水溶液。固體苦味酸易爆,長(zhǎng)制成飽和水溶液保存。
5、升汞
升汞又叫氯化汞,是白色粉末,以針狀結(jié)晶為最純。通常固定時(shí)用飽和水溶液,有時(shí)也用70%酒精作溶劑,不單獨(dú)用作固定劑。升汞的穿透力較弱,通常用于小型材料,對(duì)蛋白質(zhì)有強(qiáng)烈的沉淀作用,硬化程度中等。
固定液用飽和溶液,濃度約為7%。
6、卡爾氏(Carl’s)液
配方
95%酒精?170毫升?蒸餾水?280毫升
福爾馬林?60毫升?冰醋酸?20毫升
冰醋酸要在臨用前加入。
這時(shí)極好的昆蟲保存液,常用來殺死和保存小型、身體柔軟的種類入螨、蜈蚣、馬陸等。在這溶液里加入少量甘油,能防止蟲體變脆。
7、卡諾氏(Carnoy’s)液
配方
純酒精?6份?冰醋酸?1份
氯仿?3份
這種固定液能固定細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核,尤其適宜于固定染色體,所以多用于細(xì)胞學(xué)的質(zhì)片,還用來固定腺體、淋巴組織以及原生動(dòng)物的胞殼等。這種固定液穿透得快,因此一般小塊組織固定20~40分鐘,大型材料不超過3~4小時(shí)。固定后用95%或純酒精洗滌,換液兩次,移到石蠟中或用80%酒精保存。
8、吉爾桑氏(Gilson)液
配方
60%酒精?50毫升?冰醋酸?2毫升
80%硝酸?7.5毫升?升汞?10克
蒸餾水?440毫升
這是常用的固定液,適用于肉質(zhì)菌類,特別是柔軟膠質(zhì)狀的材料如木耳等,也廣泛用于無脊椎動(dòng)物和一般組織和蛙胚的固定。固定時(shí)間18~20小時(shí),然后用50%酒精沖洗材料,除去升汞。如果用水沖洗,會(huì)使材料膨脹?;旌弦罕4?4小時(shí)后失效。
9、福爾馬林–醋酸–酒精溶液(FAA)液
配方
50%酒精?85毫升?福爾馬林?10毫升
冰醋酸?5毫升
這種固定液適用于固定一般植物莖、葉組織,昆蟲和甲殼類動(dòng)物。液組織在這溶液里固定12小時(shí),木質(zhì)化組織要固定1周,材料也可在此液中長(zhǎng)期保存。固定后的材料放在50%酒精中沖洗1~2次。
10、克來寧堡氏(Kleinenberg’s)液
配方
在20%硫酸水溶液內(nèi)加入苦味酸,直到飽和。
這種固定液適用于雞胚的固定,也用于許多小型海洋生物的固定。
11、包因氏(Bouin’s)液
配方
苦味酸飽和水溶液?75毫升?冰醋酸?5毫升
福爾馬林?25毫升
這是常用的良好固定劑,滲透迅速,固定均勻,組織收縮少,染色后能顯示一般的微細(xì)結(jié)構(gòu)。一般動(dòng)物組織、無脊椎動(dòng)物的卵和幼蟲以及一般組織學(xué)、胚胎學(xué)的材料,如植物組織的根尖和胚囊都可用它來固定。一般組織固定24~48小時(shí),小塊組織固定4~16小時(shí),動(dòng)物材料能在這種固定液中長(zhǎng)期保存。固定后,動(dòng)物材料用70%酒精沖洗凈苦味酸,到無黃色為止(用酒精沖洗時(shí),加幾滴氨水,可加快除去黃色);植物材料用20%酒精沖洗幾次。
12、紹丁氏(Schaudinn’s)液
配方
甲液?升汞飽和水溶液?66毫升
95%酒精?33毫升
乙液?冰醋酸?1毫升
甲、乙液要在臨用前混合。
這種固定液適用于固定有鞭毛的原生動(dòng)物、植物的精子和游動(dòng)孢子等。材料如制作涂布裝片,可在40攝氏度下固定10~20分鐘。
13、眼球固定液
配方
丙酮?40毫升?冰醋酸?1.5毫升
升汞?2克?甲醛?10毫升
蒸餾水?40毫升
這種固定液適用于眼球的固定,并可在固定液中長(zhǎng)期保存。
14、納瓦興氏(Nawaschin’s)液
配方
甲液?鉻酸?1.5克?冰醋酸?10毫升
蒸餾水?90毫升
乙液?福爾馬林?40毫升?蒸餾水?60毫升
臨用前將等量甲、乙液混合。
高等植物有絲分裂材料適宜在這種固定液里固定或長(zhǎng)期保存。
15、綠色標(biāo)本保存液
配方一
硫酸銅?5克?水?95毫升
這種保存液適用于綠色植物和一切植物綠色部分的保存。植物放入硫酸銅液后,由綠變黃,再由黃變綠。這時(shí)取出材料,用清水漂洗干凈,浸在5%福爾馬林液內(nèi)長(zhǎng)期保存。
配方二
硫酸銅?0.2克?95%酒精?50毫升
福爾馬林?10毫升?冰醋酸?5毫升
水?35毫升
先把硫酸銅溶于水中,然后加入配方中的其他組分。綠色標(biāo)本能長(zhǎng)期的貯存在該液中。
配方三
醋酸銅?15~30克?50%醋酸?100毫升
在50%醋酸中逐漸加入醋酸銅,直到飽和。適用時(shí)取原液1份,加水4份,即成稀釋的硫酸銅溶液。
這種保存液適用于表面有蠟質(zhì)、蛙質(zhì)、質(zhì)地較硬的綠色植物保色。加熱稀釋到醋酸銅溶液,放入植物,輕輕翻動(dòng),到植物由綠轉(zhuǎn)黃再轉(zhuǎn)綠色時(shí)取出植物,用清水漂洗后,浸入5%福爾馬林液內(nèi)保存。
16、紅色標(biāo)本保存液
配方一
甲液?硼酸?3克?福爾馬林?4毫升
水?400毫升
乙液?亞硫酸?2毫升?硼酸?10克
水?488毫升
把紅色的果實(shí)浸在甲液里1~3天,等果實(shí)由紅色轉(zhuǎn)深棕色時(shí)取出,移到乙液里保存,同時(shí)在果實(shí)內(nèi)注入少量乙液。
配方二
氯化鋅?2份?福爾馬林?1份
甘油?1份?水?40份
先把氯化鋅溶解在水里,然后加入配方中其他組分。溶液如果渾濁而有沉淀,應(yīng)過濾后使用。紅色果實(shí)能在此液中保存。
17、黃色標(biāo)本保存液
配方一
甲液?硫酸銅?5克?水?95毫升
乙液?6%亞硫酸?30毫升?甘油?30毫升
95%酒精?30毫升?水?900毫升
先把植物標(biāo)本在甲液中浸1~2天,取出洗凈后,浸入乙液中保存,同時(shí)在果實(shí)內(nèi)注入少量乙液。
配方二
6%亞硫酸?568毫升?80%酒精?568毫升
水?450毫升
植物材料能在這種保存液中長(zhǎng)期保存。
18、紫色標(biāo)本保存液
配方一
95%酒精?20毫升?福爾馬林?20毫升
水?60毫升
使用時(shí),取1份原液加9份水稀釋,植物材料能在這溶液中保存。
配方二
食鹽飽和水溶液?30毫升?水?175毫升
福爾馬林?20毫升?甘油?少量
植物材料能在這溶液中保存。
19、白色標(biāo)本保存液
配方一
甲液?5%硫酸銅溶液
乙液?1~4%亞硫酸溶液
全白色植物材料能浸在乙液中保存。雜有綠色的白色植物材料先浸在5%硫酸銅溶液內(nèi)1~3天,用清水漂洗后浸在乙液中保存。
配方二
氯化鋅?32克?95%酒精?125毫升
水?1000毫升
把氯化鋅溶于水中,再加入酒精。植物材料能在這溶液中保存。
20、綠色幼蟲保存液
甲液?福爾馬林?4毫升?醋酸銅?1克
硝酸鉀?1克?水?100毫升
乙液?甘油?20毫升?醋酸鉀?10克
福爾馬林?1毫升?水?100毫升
先把昆蟲幼蟲放在80攝氏度熱水中燙死,曬干后放在甲液中固定1星期左右,最后放入稀釋一倍的乙液中保存。
配方二
甲液?95%酒精?90毫升?甘油?2.5毫升
福爾馬林?2.5毫升?冰醋酸?2.5毫升
氯化銅?3克
乙液?冰醋酸?5毫升?福爾馬林?4毫升
水?100毫升
將絕食1~2天的幼蟲,用注射器從肛門向體內(nèi)注射甲液,12小時(shí)后轉(zhuǎn)入乙液內(nèi)保存,約20天更換1次乙液。
21、黃色幼蟲保存液
甲液?苦味酸飽和液?10毫升?冰醋酸?5毫升
福爾馬林?2.5毫升
乙液?與綠色幼蟲保存液配方二乙液相同
用注射器從幼蟲肛門內(nèi)注入甲液,12小時(shí)后轉(zhuǎn)入乙液內(nèi)保存。
22、紅色幼蟲保存液
硼砂?2克?50%酒精?100毫升
昆蟲幼蟲能在這溶液中保存。
23、動(dòng)物內(nèi)臟原色保存液
甲液?福爾馬林?200毫升?硝酸鉀?15克
醋酸鉀?30克?水?1000毫升
乙液?甘油?200毫升?醋酸鉀?100克
麝香草酚?2.5克?水?1000毫升
先把材料放在甲液內(nèi)固定,固定時(shí)間根據(jù)材料的大小而定,一般需1~5天。當(dāng)材料失去自然色澤而呈暗褐色時(shí),用手輕輕擠壓,直到?jīng)]有淡紅色血水流出時(shí),取出材料,用清水沖洗,在浸在85%酒精中3~24小時(shí)(不能太久,否則易破壞色素),到血色恢復(fù)后,浸在乙液中保存。