TAP培養(yǎng)基是比較難配置的藻類培養(yǎng)基之一,其中的Hunter微量元素貯存液(Hunter’s trace elements)是非常常用的微生物培養(yǎng)基添加劑,為微生物的生長提供必需的微量元素。Hunter’s微量元素溶液配方是Hunter等人1950年發(fā)表的,至今配方在很多不同微生物培養(yǎng)基中都有使用,包括衣藻、曲霉等。Hunter微量元素貯存液常用來配制基礎(chǔ)培養(yǎng)基。
Hunter’s trace elements配制起來十分復雜,且由于其中有易氧化的亞鐵離子和二價錳離子,因此有效的配制方法非常重要,否則配制出來的溶液則起不到應(yīng)有的效果。
Hunter’s微量元素溶液配方與配制方法
1000X Hunter微量元素溶液的配方如下:
標準配制方法:
1. 除EDTA外,將以上溶液混合,加熱煮沸,加入EDTA溶液。此時溶液應(yīng)該為綠色。
2. 待溫度降至70度時,加入80ml 20%氫氧化鉀溶液(預(yù)熱)。
3. 待溶液溫度冷卻至室溫時定容至1L 。
4. 用錐形瓶盛裝配制好的Hunter’s trace elements,用棉花塞堵住瓶口。每天晃動一次,使空氣流通?;蛴?0ml移液管反復吹打溶液,效果更佳。如此持續(xù)1~2周。
5. 用兩層濾紙過濾Hunter微量元素貯存液,濾出溶液應(yīng)該是清澈的,否則再過濾一次,直到最終溶液澄清為止。
6. 將溶液分裝后低溫保存。此方法法可放大。
新配的Hunter微量元素溶液是淺綠色,透明,放置一段時間后逐漸變成深紅色,最終為紫色,并且在溶液底部生成鐵銹色沉淀。如果沒有沉淀生成,檢測pH,用氫氧化鉀或鹽酸調(diào)節(jié)至6.7。
Hunter’s trace elements終溶液應(yīng)該是波爾多酒紅色,或棗紅色。但pH的微小變動會影響溶液顏色。作者補充說,自己曾配制過一批葡萄紫色的,并沒有影響效果。
Scott和Kafer對Hunter微量元素溶液的配制方法做了改良,以下是改良后的配制方法:
溶液A的配制:
1. 稱取以上組分,按照給出的順序,依次加入到80ml去離子水中。不能用自來水,不能用純凈水!
2. 用KOH顆粒調(diào)節(jié)pH至5.5。不能用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH!
配制好的溶液A呈金黃色,透明。
溶液B的配制:
稱取以上組分,按照給出的順序,依次加入到80ml去離子水中,溫和加熱攪拌至完全溶解。
將溶液A和溶液B混合,先用KOH顆粒,再用KOH溶液調(diào)節(jié)pH至6.5,定容至200ml。放4度冰箱中保存。不能用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH!
Hunter’s trace elements終溶液配制方法
與傳統(tǒng)配制方法一樣,剛剛配制好的溶液呈淺綠色,透明。放置2周后Hunter微量元素溶液應(yīng)該變成紫色,但不會形成沉淀。此時溶液才能使用。即使有沉淀形成也不會影響使用,相反,有沉淀存在效果會更好。如果沒有以上現(xiàn)象出現(xiàn),棄掉,重新配制。