1.1藻種的采集
實驗室用藻種一是到國家法定機構(gòu)采購,二是購買商業(yè)派生藻種,三是科研中藻種交流。不管是哪種來源,均統(tǒng)一采集。采集中嚴格按照規(guī)范執(zhí)行。要求包裝可靠,采集迅速,不泄漏不污染。保證藻種合格和環(huán)境安全。采集中要有藻種傳代標識。選擇有資質(zhì)的標準藻株的合格供應(yīng)商,每批標準藻株必須附帶有供應(yīng)商的合格證或檢測報告或說明書,來證明所采購的標準藻株是合格的。
1.2標準藻株和驗收
實驗室收到標準藻株,首先應(yīng)進行符合性感官檢查,記錄藻株號和標準藻株來源途徑信息,確保溯源性清楚。同時還應(yīng)記錄標準藻株名稱和數(shù)量、生產(chǎn)日期、接收日期和有無破損等情況。
1.3凍干標準藻株的復(fù)活
1.3.1開啟產(chǎn)品包裝:先用70%酒精棉擦拭外包裝,再打開使用。
1.3.2復(fù)活:選擇合適的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件(根據(jù)藻種使用說明書,見附錄)進行復(fù)活。藻種的首次活化最好是在非選擇性瓊脂培養(yǎng)基上,除非特殊情況或特別推薦,一般不用液體培養(yǎng)基。凍干藻株的傳代次數(shù)不得超過5代,從標準藻株保藏中心購買的凍干標準藻株為第F0代。
注:培養(yǎng)基后面的數(shù)字編號為產(chǎn)品編號,如需采購,請聯(lián)系經(jīng)銷商或業(yè)務(wù)員。上表提供了藻種傳代短期保存的方法,供參考。
1.4工作藻株確認方法及依據(jù)
用無藻接種環(huán)取上述培養(yǎng)物,在相應(yīng)的培養(yǎng)基平板(營養(yǎng)瓊脂、大豆胰蛋白胨瓊脂)上或相應(yīng)的細藻鑒別平板(如伊紅美藍、麥康凱、BP等上劃線分離單個藻落,置適宜條件下培養(yǎng)(若該類微生物為厭氧藻,則培養(yǎng)條件應(yīng)為厭氧條件)。以同樣方法取真藻和酵母藻至SDA(薩布羅培養(yǎng)基)平板上或玫瑰紅鈉培養(yǎng)基平板上,23~28℃下培養(yǎng)7d;培養(yǎng)后觀察是否具有典型的藻落狀態(tài),然后挑取單一純藻落,進行革蘭染色、鏡檢,觀察其染色特征及藻體形態(tài)以確定藻種。
1.5 污染處理
假如在該平板上發(fā)現(xiàn)有其他藻落生長,則說明操作有污染或藻種不純。要將
該污染培養(yǎng)物做滅藻處理,尋找原因,重新分離挑選純藻落。
1.6藻種保存
所有藻種均由實驗室專人(雙人雙鎖)保存于專用冰箱或其它保存方式。要建立藻種登記臺帳,詳細記錄藻種采集、保管、制備、使用、處置情況;每一種藻種一定要有檢測鑒定報告(具體的的鑒定方法見藻種質(zhì)量報告鑒定證書上的方法);
具體藻種固體保存方法一般為:
將培養(yǎng)基與滅菌甘油按15%甘油比例(肉湯8.5mL+甘油1.5mL)混合,-30 ℃凍存,(可用2mL凍存管凍存多管),作為保藏儲備藻株F1代,也可使用商品化的藻種保存管。
1.7藻種的傳代
1.7.1標準藻株的復(fù)蘇:
① 藻種操作應(yīng)在無藻條件下進行,防止雜藻污染。
② 每次使用和復(fù)蘇時只需將小珠在平板上滾動或置肉湯中培養(yǎng)。
1.7.2標準儲備藻株每轉(zhuǎn)接一次須進行確認。(確認方法一般為他們各自獨有的形態(tài),在鑒別培養(yǎng)基上的形態(tài))
1.7.3工作藻株轉(zhuǎn)接的方法:
①、配制營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,121℃高壓滅藻15分鐘后分裝在試管內(nèi),冷卻后備用。
②、在無菌條件下,用接種環(huán)挑取藻苔至新鮮試管上作“米”字形劃線接種,放置在36℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24小時。
1.7.4工作藻株的使用
1.7.4.1內(nèi)部質(zhì)量控制:一個月一次陽性對照、培養(yǎng)基每批驗收;
1.7.4.2外部質(zhì)量控制:能力驗證、實驗室比對;
1.7.5工作藻株的期間核查
1.7.5.1期間核查的頻率:每半年對使用標準藻株進行一次期間核查。
1.7.5.2工作藻株期間核查的方法及依據(jù):同工作藻株的確認一樣。
1.7.5.3建立標準藻株期間核查記錄。
1.8藻種的標識和使用期限:
1.8.1標識:藻種代數(shù)的計算為干粉藻種為第0代,轉(zhuǎn)接一次加一代。具體標識為:例小球藻第0代,標識為CL-0,第一代標識為CL-01第一代有12支,則CL-01-01、……、CL-01-12;并標明日期:如2016.02.13這樣填寫。
1.9 藻種的保藏
1.9.1將試管內(nèi)藻種放入冰箱中2~8℃冷藏保存。
1.9.2將傳代并經(jīng)過培養(yǎng)后的藻種放入冰箱中2~8℃保存。每支保存藻種需標明藻名、標準編號、傳次、傳代日期。
1.10藻種的銷毀
1.10.1藻種使用后或超過貯存期的應(yīng)進行銷毀。
1.10.2需銷毀的藻種,應(yīng)用高壓蒸汽(121℃)滅藻30分鐘。
1.10.3滅藻后,再進行清洗和處理。
1.10.4銷毀的藻種應(yīng)做好記錄。銷毀時由化驗負責人監(jiān)督銷毀,保管人員負責銷毀。