如何发布网络小说,小说排行榜完结版 http://wuyief.cn 淡水藻、海水藻、藻種、光合細(xì)菌以及光生物反應(yīng)器制造商 Wed, 22 Jun 2016 08:43:30 +0000 zh-Hans hourly 1 https://wordpress.org/?v=6.6.2 單細(xì)胞藻種質(zhì)分離、培養(yǎng)和應(yīng)用 http://wuyief.cn/microalgae-application.html http://wuyief.cn/microalgae-application.html#respond Tue, 31 Dec 2013 13:30:55 +0000 http://wuyief.cn/?p=2181 第一章 藻種的分離技術(shù) 第一節(jié) 采樣方法 水樣可以取自任何有可能生長所需單胞藻的水體,通常在海岸邊退潮后留下的小水洼中或者在養(yǎng)殖場、鹽場等地方的小水坑中,生長有適合靜水培養(yǎng)的單胞藻類,而且比較純。在實(shí)驗(yàn)場、育苗場的一些水池、水桶中都有可能出現(xiàn)比較純的藻類。采樣時要同時測定水樣的溫度和鹽度,供分離、培養(yǎng)時參考。 水樣采回后,進(jìn)行現(xiàn)微鏡檢查,如果需要分離的藻類比較多,可以立即進(jìn)行分離。如果在水樣中有需 […]

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第一章 藻種的分離技術(shù)

第一節(jié) 采樣方法

水樣可以取自任何有可能生長所需單胞藻的水體,通常在海岸邊退潮后留下的小水洼中或者在養(yǎng)殖場、鹽場等地方的小水坑中,生長有適合靜水培養(yǎng)的單胞藻類,而且比較純。在實(shí)驗(yàn)場、育苗場的一些水池、水桶中都有可能出現(xiàn)比較純的藻類。采樣時要同時測定水樣的溫度和鹽度,供分離、培養(yǎng)時參考。

水樣采回后,進(jìn)行現(xiàn)微鏡檢查,如果需要分離的藻類比較多,可以立即進(jìn)行分離。如果在水樣中有需要的藻類,但是數(shù)量不多,就要進(jìn)行預(yù)培養(yǎng),待其繁殖起來后再分離。預(yù)培養(yǎng)可以用500ml的三角燒瓶,加入150ml的培養(yǎng)液,然后把經(jīng)350目篩絹過濾的水樣150ml接種進(jìn)去,在一定的溫度和光照下靜止培養(yǎng),每天搖動1~2次。用作預(yù)培養(yǎng)的培養(yǎng)液,可選擇各類藻類通用的培養(yǎng)液配方或者同時采用幾種不同藻類的培養(yǎng)液同時分別培養(yǎng)。預(yù)培養(yǎng)的培養(yǎng)液的濃度應(yīng)小些,一般只用原配方的1/2或1/4。如果要分離的藻類的最適生長條件是已知的,那就在其最適的光照和溫度下培養(yǎng)。如果不知其最適生長條件,那就在人為設(shè)定的條件下培養(yǎng),以便適應(yīng)應(yīng)用時的特定環(huán)境。

第二節(jié) 分離方法

一、微吸管分離法

用直徑0.5厘米、長35厘米的普通玻璃管,在中央部分加熱,拉長6~10厘米,使玻璃管的直徑縮小至0.06~0.1厘米,把它折斷后即成二個吸管。把一團(tuán)棉絮塞進(jìn)吸管的寬大一端,然后放入高壓滅菌器中消毒。消毒后,再在酒精燈上加熱吸管的細(xì)端,用鑷子拉成極細(xì)的微管,直徑縮小至0.08~0.16毫米即可。微吸管在入水的瞬間,因毛細(xì)管的作用會吸入微量的水。將藻液水樣放在凹玻片上,在顯微鏡下用微吸管仔細(xì)地吸出單個藻體,滴在載玻片上,在顯微鏡下確認(rèn)是所要分離的單個藻體后,移入經(jīng)滅菌的培養(yǎng)液中培養(yǎng)。

二、平板分離法

按所要分離的藻類的特性,選用合適的培養(yǎng)液,在培養(yǎng)液中加入1~1.5%的瓊脂,加熱將瓊脂溶化。加熱后要加淡水補(bǔ)充蒸發(fā)掉的水分。然后,按照微生物學(xué)中固體培養(yǎng)基的制作方法倒平板、滅菌。

在無菌操作箱中,用接種針蘸取少量藻液,在固體培養(yǎng)基上劃蛇形線,藻細(xì)胞就會散布在瓊脂培養(yǎng)基的表面。

另一種使藻細(xì)胞散布在培養(yǎng)基表面的方法是用醫(yī)用口腔噴霧器,將經(jīng)稀釋的藻液噴在培養(yǎng)基的表面。

將接種好的培養(yǎng)皿放在有適合的光照和溫度的地方培養(yǎng)。一般經(jīng)過十來天的培養(yǎng)就會在培養(yǎng)基上長出相互間隔的藻落。通過顯微鏡檢查,找出所要的純的藻落,再用已消毒的接種針從培養(yǎng)基上挑取藻體,移入經(jīng)滅菌的培養(yǎng)液中培養(yǎng)。

三、水滴分離法

先將欲分離的藻液稀釋,用微吸管將少量藻液吸出,滴在載玻片上,每張載玻片上可以滴數(shù)滴。水滴大小以在低倍顯微鏡下一個視野能包括整個水滴為準(zhǔn)。在顯微鏡下逐個觀察水樣,挑選水滴中只有所要分離的單個藻體,而沒有其他任何雜藻或小動物的,移入經(jīng)滅菌的培養(yǎng)液中培養(yǎng)。

四、稀釋分離法

用已消毒的試管5支,在第一支試管中加蒸餾水10毫升,第二和第五支試管都加5毫升,用高壓蒸汽消毒,待冷卻后,在第一支試管中滴入混合藻液1滴,充分震蕩,使其均勻稀釋。再用經(jīng)消毒的吸管從第一支吸管中吸取5毫升到第二支吸管中,充分震蕩后再取5毫升到第三支試管中,如此直至第五個試管。再取5個已裝有消毒的培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿,加熱使培養(yǎng)基熔化,待冷卻而尚未凝固時,分別滴入5個試管中的藻液各1滴,用力震蕩,使藻液充分混入培養(yǎng)基中。等冷凝后將培養(yǎng)皿放在適合的條件下,直到培養(yǎng)基中出現(xiàn)藻落。在稀釋適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)皿內(nèi),藻落和細(xì)菌群落會充分分離。再在無菌條件下將選取單個藻落接種到固體培養(yǎng)基的表面,再培養(yǎng)。重復(fù)數(shù)次,直至得到純的藻落。

第二章 藻種的保存技術(shù)

保存藻種時可以根據(jù)保種目的和保種條件的不同分別采取不同的保種方法。

第一節(jié) 固體培養(yǎng)基保存法

此法通常把藻種接種在固體培養(yǎng)基上,在弱光低溫條件下保存,接種一次可以保存半年到一年。

保種用的固體培養(yǎng)基的營養(yǎng)濃度應(yīng)比正常的液體培養(yǎng)液的高,一般增加一倍。瓊脂量為1~1.5%。保種用的培養(yǎng)容器可用三角燒瓶、試管和克氏扁瓶。固體培養(yǎng)基分裝滅菌后,冷卻待用。

將無污染的藻種用噴霧法或劃線法接種到固體培養(yǎng)基上,在弱光條件下,讓細(xì)胞在培養(yǎng)基上慢慢地生長繁殖,可保存半年到一年。

可進(jìn)行低溫保存的藻種,最好在低溫環(huán)境中保存。接種后,首先放在光線充足的地方(防止直射光照射),使藻類細(xì)胞較快速地繁殖起來,直到培養(yǎng)基上出現(xiàn)顏色,即可放入冰箱或冷庫中,一般在5℃左右的低溫下保存。當(dāng)然,不同的藻種保存的溫度也不盡相同。每天應(yīng)給藻種幾個小時的弱光照。此法保存的時間可長達(dá)2至3年。如新月菱形藻可保存34個月,三角褐指藻可保存25個月,角毛藻和骨條藻可保存9個月。

第二節(jié)循環(huán)移養(yǎng)保存法

此法采用的容器一般為三角燒瓶(300毫升、500毫升、1000毫升等)和細(xì)口瓶(10000毫升、20000毫升等),將容器、工具消毒后,加入正常濃度的培養(yǎng)液,接種后瓶口用消毒的濾紙包扎,放在適宜的溫度和光照條件下培養(yǎng)。白天搖動瓶子數(shù)次。一般5~10天即可移樣一次。此法簡單、容易掌握,而且保存的藻種活力強(qiáng)、純度高、數(shù)量大。

資源來自:中國科學(xué)院海洋研究所海洋生物種質(zhì)庫

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分離和培養(yǎng)藻類方法 http://wuyief.cn/isolation-culture-algae-method.html http://wuyief.cn/isolation-culture-algae-method.html#respond Tue, 20 Aug 2013 14:54:18 +0000 http://wuyief.cn/?p=1577 微型單細(xì)胞藻類的分離和培養(yǎng)方法基本上與菌類的方法相似,但還需加上光照條件,并以液體培養(yǎng)為主。在大量培養(yǎng)時,可不必考慮無菌條件。 上海光語生物科技有限公司提供的光生物反應(yīng)器可以用來實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)藻類。 一、目的 學(xué)習(xí)藻類的分離和培養(yǎng)方法 二、藥品、材料和用具 水生生物培養(yǎng)槽,玻璃片(面積稍大于培養(yǎng)槽),橡皮管,顯微鏡,三角燒瓶,試管,篩絹,棉塞,微吸管,凹玻片,滅菌鍋,載玻片,吸管,培養(yǎng)皿,人工光源,木 […]

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微型單細(xì)胞藻類的分離和培養(yǎng)方法基本上與菌類的方法相似,但還需加上光照條件,并以液體培養(yǎng)為主。在大量培養(yǎng)時,可不必考慮無菌條件。

上海光語生物科技有限公司提供的光生物反應(yīng)器可以用來實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)藻類。

一、目的

學(xué)習(xí)藻類的分離和培養(yǎng)方法

二、藥品、材料和用具

水生生物培養(yǎng)槽,玻璃片(面積稍大于培養(yǎng)槽),橡皮管,顯微鏡,三角燒瓶,試管,篩絹,棉塞,微吸管,凹玻片,滅菌鍋,載玻片,吸管,培養(yǎng)皿,人工光源,木盆(或小型實(shí)驗(yàn)池),充二氧化碳?xì)怃撈?,抽氣泵,離心機(jī)。

土壤抽出液,青霉素,鏈霉素,瓊脂,硝酸鈣,磷酸二氫鉀,磷酸氫二鉀,過磷酸鈣,硫酸鎂,氯化鉀,碳酸鈉,三氯化鐵,硅酸鈉,葡萄糖,蛋白胨,硫酸銨,硝酸銨,氯化鈣,碳酸氫鈉,鉬酸,氯化鈉,檸檬酸鐵,硫酸錳,人尿,海泥抽出液,食鹽。

三、操作

生長在靜水或水流緩慢河流中的藻類,培養(yǎng)比較容易。取到實(shí)驗(yàn)室后,要立刻從材料瓶中移到寬大的水生生物培養(yǎng)槽內(nèi)。為了培養(yǎng)大的絲狀藻,要利用寬的、不高的容器。這些容器要用玻片蓋住,以防止培養(yǎng)物受灰塵沾污。倒入容器的水要達(dá)到容器高度的一半,或稍多些,使水面上還有充分空氣。在容器邊緣,要用一小塊縱切橡皮管墊住,可使玻片不致緊貼容器,空氣才能進(jìn)入容器中。細(xì)微的藻類如團(tuán)藻目、硅藻門能很好地生活于培養(yǎng)皿中。很多藻類如顫藻屬、水綿屬的若干種、輪藻屬等可在實(shí)驗(yàn)室中保存很多年。

在迅速流動水中生長的藻如絲藻屬、毛枝藻屬等比較難于培養(yǎng),因?yàn)樗鼈円蠼?jīng)常輸入氧氣。在水層較高水中,在高容器中,這些藻類迅速地死亡。為了把這些藻類保存到實(shí)驗(yàn)時,應(yīng)當(dāng)把它們分成一些小部分,放在水層較薄的、寬的容器內(nèi),并須常常換水,把空氣吹入水中。還可以用橡皮管把水生生物培養(yǎng)槽和水龍頭連結(jié)起來,建立有流水的水生生物培養(yǎng)槽。

在水生生物培養(yǎng)槽中培養(yǎng)藻類時,應(yīng)盡可能創(chuàng)造和保持藻類天然生存條件。把藻類培養(yǎng)在從采集藻類那一水域取來的水中,或其他天然水(尤其不能用自來水,因其中含很多氯氣,必要的話,也須置較長時間,或加以煮開),或在水中加入混合養(yǎng)料,這些養(yǎng)料是由制造有機(jī)物質(zhì)所必需的礦質(zhì)鹽構(gòu)成。

在夏季,不要把藻類培養(yǎng)物放在直射太陽光下,而要放在涼爽的場所,例如向北窗臺上。在秋、冬季節(jié),如希望藻類保持積極生活活動狀態(tài),就要把培養(yǎng)物移到有人工光照處。

以上是一般藻類粗放的培養(yǎng)、保存方法。如要作較深入實(shí)驗(yàn),需注意以下問題:

1.藻種的分離

藻類培養(yǎng)首先要有藻種。從天然水域的混雜生物群中,用一定方法把所需藻類個體分離出來,而獲純種培養(yǎng)。這種方法稱為藻種分離和純化,又稱純培養(yǎng)法。

真正的“純種培養(yǎng)”是指在排除包括細(xì)菌在內(nèi)的一切生物的條件下進(jìn)行的培養(yǎng)。這是進(jìn)行科學(xué)研究不可缺少的技術(shù),而在生產(chǎn)性培養(yǎng)中不排除細(xì)菌的稱之為“單種培養(yǎng)”。

(1)采樣和預(yù)備培養(yǎng):首先要采集有需要分離藻類的水樣,采回后在顯微鏡下檢查。如發(fā)現(xiàn)需要分離的藻類數(shù)量較多時,可立即分離。若數(shù)量很少,最好先進(jìn)行預(yù)備培養(yǎng),待其增多后,再分離。

用作預(yù)備培養(yǎng)的培養(yǎng)液,各種藻類是不同的,對一些難以培養(yǎng)的藻類一般加入土壤抽出液較好。預(yù)備培養(yǎng)液營養(yǎng)成分濃度應(yīng)小些,一般只有原配方的1/4~1/2。如水樣中藻類種類較多,就應(yīng)使用幾種不同的培養(yǎng)液,使藻類在適合于自己繁殖的培養(yǎng)液中繁殖起來。

可用三角燒瓶或試管作培養(yǎng)容器,加入容量1/4~1/3培養(yǎng)液。然后把經(jīng)篩絹過濾除去大型浮游生物的水樣接種進(jìn)去,放在合適溫度下或室內(nèi)靠北窗口下培養(yǎng)。在培養(yǎng)附著藻類時,容器可靜止不動;而培養(yǎng)浮游藻類時,應(yīng)該每天搖動一次。

有的藻類在普通培養(yǎng)液中完全不能繁殖,有的繁殖非常困難。此時需改變培養(yǎng)液濃度,加入葡萄糖、蛋白胨等有機(jī)物,補(bǔ)充微量元素和輔助生長物質(zhì),加入土壤抽出液,就有可能獲較好效果。

土壤抽出液制作方法:先在試管底部,加入高約1cm土壤(采用腐殖化的農(nóng)田和庭院土)。再加入水使達(dá)5cm,塞上棉塞,采用蒸氣間隙滅菌,每天滅菌1小時,連續(xù)二天。由于氣泡上升,棉塞可能弄臟。因此,最好先在水中煮一段時間,使氣泡跑掉后,再加棉塞進(jìn)行滅菌。

(2)分離方法:常用下列四種。

1)微吸管(毛細(xì)管)分離?選直徑較細(xì)(約5毫米)玻管,在火焰上加熱,待快熔時,快速拉成口徑極細(xì)的微吸管。將稀釋適度藻液水樣,置淺凹載玻片上,鏡檢。用微吸管挑選要分離的藻體,認(rèn)真仔細(xì)地吸出,放入另一淺凹載片上,鏡檢這一滴水中是否達(dá)到純分離的目的。如不成功,應(yīng)反復(fù)幾次,直至達(dá)到分離目的為止。然后移入經(jīng)滅菌的培養(yǎng)液中培養(yǎng),一般在每個培養(yǎng)皿中接20~30個個體。從分離出少量細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)到200毫升的培養(yǎng)量,如硅藻一般需20天以上。為了較長時期保存藻種,可將分離到的藻種用青霉素(1000~5000單位或鏈霉素(20ppm)處理后,獲得較純藻種。

此法操作技術(shù)要求高,要細(xì)心。往往吸取一個細(xì)胞,要反復(fù)幾次才能成功,且適于分離個體較大藻類。

2)水滴分離法?用微吸管吸取稀釋適度藻液,滴到消毒過載片上,水滴盡可能滴小些,要求在低倍鏡視野中能看到水滴全部或大部分。一個載片上滴2~4滴,間隔一定距離,作直線排列。如一滴水中只有幾個所需同種藻類個體,無其他生物混雜,即用吸管吸取培養(yǎng)液,把這滴水沖入裝有培養(yǎng)液并經(jīng)滅菌試管或小三角瓶中去。如未成功,需反復(fù)重做,直到達(dá)到目的。

此法簡便易行,尤其適宜于分離已在培養(yǎng)液中占優(yōu)勢種類。分離受少量生物污染培養(yǎng)液中的藻類多用此法。操作時同樣要求細(xì)致、認(rèn)真,使用工具及培養(yǎng)液經(jīng)嚴(yán)格消毒。

3)稀釋分離法?把含有需要分離的藻類而又混雜有其他生物的水樣,取其一定量,用培養(yǎng)液稀釋。通過稀釋到適宜程度的方法,達(dá)到把原混雜生物單個分離培養(yǎng)的目的。

首先把水樣稀釋到每一滴含有一個左右的生物細(xì)胞(也可能一個都沒有,也可能有兩個),在稀釋過程中配合顯微鏡檢查,調(diào)節(jié)稀釋度,然后準(zhǔn)備裝有1/4容量培養(yǎng)液的試管20支,每一試管加入稀釋適宜水樣一滴,搖勻,進(jìn)行培養(yǎng)。待藻類生長繁殖達(dá)一定濃度時,再檢查是否達(dá)到分離目的,若未達(dá)到,再重復(fù)做。

此法操作簡單易行,但有一定程度盲目性,比不上水滴分離法效果好。

4)平板分離法?這個方法的培養(yǎng)基制備和分離方法,與菌類的平板分離法基本相同,只是培養(yǎng)基配方不同。也可將稀釋藻液裝入消毒過的小型噴霧器中(可使用醫(yī)用喉頭噴霧器),打開培養(yǎng)皿蓋,把藻液噴射在培養(yǎng)基平面上,形成分布均勻的薄層水珠。

接種后,蓋上蓋,放在適宜的光、溫條件下培養(yǎng)。一般經(jīng)過十余天,就可在培養(yǎng)基上發(fā)生互相隔離的藻類群落,通過顯微鏡檢查,尋找需要的純藻群落,然后用消毒過的接種環(huán)移植到另一平板培養(yǎng)基培養(yǎng),也可直接移植到裝有培養(yǎng)液并經(jīng)過滅菌的試管或小三角燒瓶中,加消毒棉花塞子,進(jìn)行培養(yǎng)。

此法較繁,但難度不大,而且可看到是否污染雜菌,對于分離已污染雜菌培養(yǎng)液的藻類更合適。

5)底棲藻的分離?在顯微鏡或放大鏡下挑取個體,一般可接種在固體培養(yǎng)基平板上,反復(fù)挑選、培養(yǎng)。

6)分離浮游藍(lán)藻?可利用其浮力大,易浮起在水面的特性;分離硅藻則可利用其易沉淀的特性。

用以上各種方法分離到藻種,需放在適宜光照條件下(靠南或北窗口附近光線充足處,但嚴(yán)防陽光直射)培養(yǎng),有條件的可控制溫度和利用人工光源。培養(yǎng)時,每天輕輕搖動1~2次,但需注意勿把培養(yǎng)液沾濕棉塞,避免雜菌污染。經(jīng)一段時間后,培養(yǎng)物顏色逐漸變深。再經(jīng)一次顯微鏡檢查,如無其他混雜生物,才達(dá)到單種培養(yǎng)目的。

2.藻種的培養(yǎng)

獲得單種培養(yǎng)后,一方面擴(kuò)大培養(yǎng),另一方面可把藻種作較長時間保存,需要時隨時取出使用。藻種培養(yǎng)要求比較嚴(yán)格,培養(yǎng)容器可用各種不同大小的三角燒瓶,容量有100、300、500、1000毫升,適于逐漸擴(kuò)大培養(yǎng)。培養(yǎng)容器和工具需經(jīng)煮沸滅菌或使用化學(xué)藥品滅菌后,用煮沸水沖洗,培養(yǎng)液用加熱滅菌法滅菌。按種后瓶口用滅菌紙包扎,放在適宜光、溫條件下培養(yǎng),每天輕輕搖動二次。大約二周后進(jìn)行一次移植。藻種在培養(yǎng)過程中必須定期用顯微鏡檢查,保持不受其他生物污染。

3.藻種的保藏

可接在固體培養(yǎng)基上,在常溫、弱光下保藏半年到一年;也可在低溫下(冰箱內(nèi))保藏,每天接受短時間(幾個小時)弱光,可保藏2~3年;如不照光,只能保藏幾個月。保藏藻種所用培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分濃度應(yīng)比正常培養(yǎng)基高一些,一般可增加一倍,瓊脂量為1~1.5%。也可在固體培養(yǎng)基上,再加培養(yǎng)液,然后接種到培養(yǎng)液中,可以避免固體培養(yǎng)基干涸,保藏效果比單用固體好。

4.培養(yǎng)液和培養(yǎng)基的配方

配方極多,每種配方主要適用于一定藻種,這里介紹比較常用的幾種:

水生4號和克諾普(Knop)培養(yǎng)液,一般用于綠藻;藍(lán)藻可用朱氏10號或水生105號無氮培養(yǎng)基(后者適于固氮藍(lán)藻);硅藻可用朱氏10號和水生硅1號培養(yǎng)基;另外還有海產(chǎn)綠藻、硅藻的培養(yǎng)基。常用培養(yǎng)基配方見表1。

 

分離培養(yǎng)藻類方法
分離培養(yǎng)藻類常用培養(yǎng)基配方

以上用水量都是加至1000mL,海藻培養(yǎng)液用海水,如無海水可用淡水1000mL加30克食鹽代替。土壤抽出液用菜園土1份和水2份比例混合攪勻,靜置,取上清液;海泥抽出液也可用同樣比例制備。如配制固體培養(yǎng)基,可在培養(yǎng)液內(nèi)加入1.5%瓊脂。

從以上各種配方,可看到配制藻類培養(yǎng)液的幾條原則:

(1)要有適量氮源(除固氮藍(lán)藻外),如氨鹽、硝酸鹽、有機(jī)氮等。

(2)應(yīng)包括主要元素鉀、磷、鎂、硫、鈣等。

(3)要考慮各種鹽類總濃度和pH是否適合藻類需要,可用碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH。

(4)要加入各種藻類需要的微量元素,如鐵、錳、銅、鋅等(后幾種包括在土壤抽出液中)。

(5)要滿足某些藻類特殊需要,如藍(lán)藻需鉬,硅藻需硅。

(6)要添加適量生長物質(zhì)如維生索B1、B2等(包括在土壤抽出液中)。

5.大量培養(yǎng)過程

包拈接種、培養(yǎng)、采收等。

(1)接種:一般要求選取生活力強(qiáng)、生長旺盛藻種??上葘饪s藻種用連續(xù)稀釋法,制備一定濃度的懸浮藻液,然后接入培養(yǎng)容器。接種時注意藻種和培養(yǎng)液比例要適當(dāng),使藻細(xì)胞在新培養(yǎng)液中達(dá)到一定數(shù)量。使一開始培養(yǎng),藻類在培養(yǎng)液中占優(yōu)勢,另一方面還可縮短培養(yǎng)周期,這是培養(yǎng)得到成功的經(jīng)驗(yàn)之一。在環(huán)境條件不很適合情況下,更需提高接種量。一般所用藻種濃度,根據(jù)藻類體積大小,每毫升30萬~300萬個,采用1∶2~1∶5的比例。還需注意接種時間,在自然光條件下,最好在上午8~10時,不宜在晚上。尤其是能運(yùn)動種類,此時明顯向上浮游,接種時可把上浮優(yōu)質(zhì)藻類吸出做藻種,起選種作用。

(2)培養(yǎng)管理:主要是使已接種培養(yǎng)物在相對穩(wěn)定適宜環(huán)境中大量繁殖生長。要注意以下因素:

1)二氧化碳濃度在開放式不通氣方法培養(yǎng)中,攪拌是十分必要的,可以增加水和空氣的接觸面,使空氣中二氧化碳溶解到培養(yǎng)液中,而且?guī)椭恋碓孱惣?xì)胞上浮獲得光照。在通氣培養(yǎng)中,培養(yǎng)液內(nèi)應(yīng)維持二氧化碳濃度在0.1~5%之間。

2)光照強(qiáng)度?利用太陽光源培養(yǎng)時,一般在室內(nèi)培養(yǎng)可放在近窗口地方,防止強(qiáng)直射光照射?;蚶萌斯す庠矗?0~100瓦電燈或日光燈),需1500~3000勒克斯/厘米2。

3)溫度?適溫一般在10~30℃之間,最適溫常為20~25℃。若在室外培養(yǎng),夏季中午高溫,冬季早晚低溫,常造成不利影響,需設(shè)法調(diào)節(jié)。

4)無機(jī)營養(yǎng)?應(yīng)不斷添加新鮮培養(yǎng)液,及時補(bǔ)充被藻吸收后減少了的某些元素。

5)注意pH變化?如變動過大,可用酸、堿調(diào)節(jié)。

6)適當(dāng)控制培養(yǎng)物中藻細(xì)胞濃度?過高會引起光照和無機(jī)營養(yǎng)不足,并導(dǎo)致pH上升。一般控制在0.3g(干重)/L范圍內(nèi)。

7)及時觀察和檢查藻類生長情況?可以通過培養(yǎng)物呈現(xiàn)的顏色、藻類細(xì)胞運(yùn)動情況、是否有沉淀附壁、菌膜及敵害生物污染跡象等觀察而了解一般的生長情況。藻種和中繼培養(yǎng)每半月進(jìn)行一次全面顯微鏡檢查。大量培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)有不正常現(xiàn)象,應(yīng)立即鏡檢,目的有兩個:了解藻細(xì)胞生長情況,并檢查有無敵害生物污染。

(3)采收:培養(yǎng)液中藻體的適時采收,既是培養(yǎng)的目的,也是繼續(xù)培養(yǎng)的手段。因?yàn)橥ㄟ^采收一部分藻體,可使藻細(xì)胞濃度保持恒定。通常在培養(yǎng)物細(xì)胞濃度達(dá)到干重0.4~0.5克/升時,即可采收培養(yǎng)總量1/3的藻體。

采收時,先攪拌培養(yǎng)物,取出1/3量藻液,置于沉淀缸中,加入2%~3%明礬或6%飽和石灰水。約1~2小時,藻細(xì)胞即可完全沉淀,取出沉淀,離心、濃縮、烘干。在大型培養(yǎng)池中采收藻體,可另外設(shè)計(jì)適當(dāng)?shù)墓に嚵鞒獭?/span>

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