在單細(xì)胞生物體中很少發(fā)現(xiàn)這種復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，但發(fā)現(xiàn)在植物和藻類細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的產(chǎn)生能量的線粒體和含有色素的質(zhì)體已經(jīng)在warnowiid dinoflagellates中組合形成復(fù)雜的“ocelloid”或眼睛狀結(jié)構(gòu)。

一個(gè)國(guó)際科學(xué)家團(tuán)隊(duì)，包括沙特阿拉伯國(guó)王阿卜杜拉科技大學(xué)的附屬機(jī)構(gòu)，研究了甲藻的基因及其各自的結(jié)構(gòu)，并在細(xì)胞上使用電子顯微鏡和層析成像。他們發(fā)現(xiàn)，這種細(xì)胞包含一個(gè)類似角膜的線粒體層和一個(gè)視網(wǎng)膜質(zhì)體體。甲藻中的質(zhì)體起源于與紅藻的古老共生。

“這是線粒體和質(zhì)體之間新的整合水平，”加拿大不列顛哥倫比亞大學(xué)的進(jìn)化動(dòng)物學(xué)家Gregory Gavelis說?！斑@兩種細(xì)胞器都是細(xì)胞的’發(fā)電廠’。他們?cè)谶@里聚集形成一個(gè)眼睛是非常意外的，并表明進(jìn)化總能找到舊部件的新用途，“他說。

眼睛的功能仍然不清楚，因?yàn)榭茖W(xué)家們并沒有完全了解甲藻的生命周期。它在環(huán)境中很少遇到并且極難研究?！凹?xì)胞非常’害羞’，因?yàn)樗鼈円坏┍徊?，就?huì)停止游泳和進(jìn)食。他們經(jīng)常爆炸，“Gavelis說。到目前為止，科學(xué)家們未能在自然環(huán)境之外培育它們。

然而，該團(tuán)隊(duì)能夠使用電子顯微鏡觀察細(xì)胞生命史的一部分，并發(fā)現(xiàn)有證據(jù)表明它們以其他甲藻為食。該團(tuán)隊(duì)認(rèn)為可以使用眼睛來檢測(cè)它們。

單細(xì)胞甲藻的意外復(fù)雜性并不止于此。“令人驚訝的是，這個(gè)物種并不只是’眼睛’，但它也有’槍’，”Gavelis說?！澳壳拔覀冋噲D找出這些類似魚叉的彈丸是如何工作的，以及細(xì)胞使用它們的原因。”

第一節(jié) 采樣方法

水樣可以取自任何有可能生長(zhǎng)所需單胞藻的水體，通常在海岸邊退潮后留下的小水洼中或者在養(yǎng)殖場(chǎng)、鹽場(chǎng)等地方的小水坑中，生長(zhǎng)有適合靜水培養(yǎng)的單胞藻類，而且比較純。在實(shí)驗(yàn)場(chǎng)、育苗場(chǎng)的一些水池、水桶中都有可能出現(xiàn)比較純的藻類。采樣時(shí)要同時(shí)測(cè)定水樣的溫度和鹽度，供分離、培養(yǎng)時(shí)參考。

水樣采回后，進(jìn)行現(xiàn)微鏡檢查，如果需要分離的藻類比較多，可以立即進(jìn)行分離。如果在水樣中有需要的藻類，但是數(shù)量不多，就要進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)，待其繁殖起來后再分離。預(yù)培養(yǎng)可以用500ml的三角燒瓶，加入150ml的培養(yǎng)液，然后把經(jīng)350目篩絹過濾的水樣150ml接種進(jìn)去，在一定的溫度和光照下靜止培養(yǎng)，每天搖動(dòng)1~2次。用作預(yù)培養(yǎng)的培養(yǎng)液，可選擇各類藻類通用的培養(yǎng)液配方或者同時(shí)采用幾種不同藻類的培養(yǎng)液同時(shí)分別培養(yǎng)。預(yù)培養(yǎng)的培養(yǎng)液的濃度應(yīng)小些，一般只用原配方的1/2或1/4。如果要分離的藻類的最適生長(zhǎng)條件是已知的，那就在其最適的光照和溫度下培養(yǎng)。如果不知其最適生長(zhǎng)條件，那就在人為設(shè)定的條件下培養(yǎng)，以便適應(yīng)應(yīng)用時(shí)的特定環(huán)境。

第二節(jié) 分離方法

一、微吸管分離法

用直徑0.5厘米、長(zhǎng)35厘米的普通玻璃管，在中央部分加熱，拉長(zhǎng)6~10厘米，使玻璃管的直徑縮小至0.06~0.1厘米，把它折斷后即成二個(gè)吸管。把一團(tuán)棉絮塞進(jìn)吸管的寬大一端，然后放入高壓滅菌器中消毒。消毒后，再在酒精燈上加熱吸管的細(xì)端，用鑷子拉成極細(xì)的微管，直徑縮小至0.08~0.16毫米即可。微吸管在入水的瞬間，因毛細(xì)管的作用會(huì)吸入微量的水。將藻液水樣放在凹玻片上，在顯微鏡下用微吸管仔細(xì)地吸出單個(gè)藻體，滴在載玻片上，在顯微鏡下確認(rèn)是所要分離的單個(gè)藻體后，移入經(jīng)滅菌的培養(yǎng)液中培養(yǎng)。

二、平板分離法

按所要分離的藻類的特性，選用合適的培養(yǎng)液，在培養(yǎng)液中加入1~1.5%的瓊脂，加熱將瓊脂溶化。加熱后要加淡水補(bǔ)充蒸發(fā)掉的水分。然后，按照微生物學(xué)中固體培養(yǎng)基的制作方法倒平板、滅菌。

在無菌操作箱中，用接種針蘸取少量藻液，在固體培養(yǎng)基上劃蛇形線，藻細(xì)胞就會(huì)散布在瓊脂培養(yǎng)基的表面。

另一種使藻細(xì)胞散布在培養(yǎng)基表面的方法是用醫(yī)用口腔噴霧器，將經(jīng)稀釋的藻液噴在培養(yǎng)基的表面。

將接種好的培養(yǎng)皿放在有適合的光照和溫度的地方培養(yǎng)。一般經(jīng)過十來天的培養(yǎng)就會(huì)在培養(yǎng)基上長(zhǎng)出相互間隔的藻落。通過顯微鏡檢查，找出所要的純的藻落，再用已消毒的接種針從培養(yǎng)基上挑取藻體，移入經(jīng)滅菌的培養(yǎng)液中培養(yǎng)。

三、水滴分離法

先將欲分離的藻液稀釋，用微吸管將少量藻液吸出，滴在載玻片上，每張載玻片上可以滴數(shù)滴。水滴大小以在低倍顯微鏡下一個(gè)視野能包括整個(gè)水滴為準(zhǔn)。在顯微鏡下逐個(gè)觀察水樣，挑選水滴中只有所要分離的單個(gè)藻體，而沒有其他任何雜藻或小動(dòng)物的，移入經(jīng)滅菌的培養(yǎng)液中培養(yǎng)。

四、稀釋分離法

用已消毒的試管5支，在第一支試管中加蒸餾水10毫升，第二和第五支試管都加5毫升，用高壓蒸汽消毒，待冷卻后，在第一支試管中滴入混合藻液1滴，充分震蕩，使其均勻稀釋。再用經(jīng)消毒的吸管從第一支吸管中吸取5毫升到第二支吸管中，充分震蕩后再取5毫升到第三支試管中，如此直至第五個(gè)試管。再取5個(gè)已裝有消毒的培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿，加熱使培養(yǎng)基熔化，待冷卻而尚未凝固時(shí)，分別滴入5個(gè)試管中的藻液各1滴，用力震蕩，使藻液充分混入培養(yǎng)基中。等冷凝后將培養(yǎng)皿放在適合的條件下，直到培養(yǎng)基中出現(xiàn)藻落。在稀釋適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)皿內(nèi)，藻落和細(xì)菌群落會(huì)充分分離。再在無菌條件下將選取單個(gè)藻落接種到固體培養(yǎng)基的表面，再培養(yǎng)。重復(fù)數(shù)次，直至得到純的藻落。

第二章 藻種的保存技術(shù)

保存藻種時(shí)可以根據(jù)保種目的和保種條件的不同分別采取不同的保種方法。

第一節(jié) 固體培養(yǎng)基保存法

此法通常把藻種接種在固體培養(yǎng)基上，在弱光低溫條件下保存，接種一次可以保存半年到一年。

保種用的固體培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)濃度應(yīng)比正常的液體培養(yǎng)液的高，一般增加一倍。瓊脂量為1~1.5%。保種用的培養(yǎng)容器可用三角燒瓶、試管和克氏扁瓶。固體培養(yǎng)基分裝滅菌后，冷卻待用。

將無污染的藻種用噴霧法或劃線法接種到固體培養(yǎng)基上，在弱光條件下，讓細(xì)胞在培養(yǎng)基上慢慢地生長(zhǎng)繁殖，可保存半年到一年。

可進(jìn)行低溫保存的藻種，最好在低溫環(huán)境中保存。接種后，首先放在光線充足的地方（防止直射光照射），使藻類細(xì)胞較快速地繁殖起來，直到培養(yǎng)基上出現(xiàn)顏色，即可放入冰箱或冷庫中，一般在5℃左右的低溫下保存。當(dāng)然，不同的藻種保存的溫度也不盡相同。每天應(yīng)給藻種幾個(gè)小時(shí)的弱光照。此法保存的時(shí)間可長(zhǎng)達(dá)2至3年。如新月菱形藻可保存34個(gè)月，三角褐指藻可保存25個(gè)月，角毛藻和骨條藻可保存9個(gè)月。

第二節(jié)循環(huán)移養(yǎng)保存法

此法采用的容器一般為三角燒瓶（300毫升、500毫升、1000毫升等）和細(xì)口瓶（10000毫升、20000毫升等），將容器、工具消毒后，加入正常濃度的培養(yǎng)液，接種后瓶口用消毒的濾紙包扎，放在適宜的溫度和光照條件下培養(yǎng)。白天搖動(dòng)瓶子數(shù)次。一般5~10天即可移樣一次。此法簡(jiǎn)單、容易掌握，而且保存的藻種活力強(qiáng)、純度高、數(shù)量大。

資源來自：中國(guó)科學(xué)院海洋研究所海洋生物種質(zhì)庫

作為生產(chǎn)性藻種培養(yǎng)用水，必須要經(jīng)過煮沸滅菌，冷卻至室溫后再使用，在冷卻過程中必須加蓋，無蓋的容器可用清潔的白紙蓋在瓶口。而二、三級(jí)藻類的培養(yǎng)用水可用化學(xué)方法來消毒，即在已經(jīng)清洗過的池子中，放入經(jīng)過沙濾或用脫脂棉過濾處理后的海水，再在池內(nèi)海水中放入若干量的漂白粉，使池內(nèi)海水中有效氯的含量為20～30毫克／升，充分?jǐn)嚢杈鶆蚝蠼?jīng)過8～10個(gè)小時(shí)的消毒，再進(jìn)行強(qiáng)充氣，一般曝氣10小時(shí)左右，再加入等當(dāng)量的硫代硫酸鈉，來中和水體中可能殘留的有效氯，并經(jīng)測(cè)定水體中無殘余有效氯后即可使用。

經(jīng)過處理后的海水最好能在短時(shí)間內(nèi)用完，盡量不要超過一天，以防止再次被污染。

二、容量和工具的消毒

作為藻種級(jí)培養(yǎng)用的三角燒瓶等容器，必須用加熱法或煮沸消毒法殺菌。作為生產(chǎn)性擴(kuò)大培養(yǎng)用的玻璃瓶、水泥池等，通常用300～400毫克／升的高錳酸鉀溶液或者含有效氯200～300毫克／升的漂白粉水溶液來浸泡消毒，具體的做法是：先用淡水或普通海水把容器或藻類池沖洗干凈，再把容器或工具放入已配制好的高錳酸鉀溶液(或漂白粉溶液)中浸泡5～10分鐘，取出后用消毒過的海水沖洗干凈即可使用。對(duì)藻類池的消毒，可用配制好的高錳酸鉀溶液(或漂白粉溶液)由池壁頂部淋灑下來，并潑灑池底，過10分鐘左右用消毒過的海水沖洗干凈即可使用。

三、加大各級(jí)培養(yǎng)中的接種比例

一般藻種級(jí)培養(yǎng)接入的藻種與新培養(yǎng)液的比例為1∶0.5～1，中間培養(yǎng)或大面積培養(yǎng)，它們的比例為1∶3～6，這樣藻液中可繁殖的單胞藻個(gè)數(shù)多，培養(yǎng)液中藻類增長(zhǎng)速度快，縮短了培養(yǎng)時(shí)間，相對(duì)減少了污染。另一方面也利用了生物間的拮抗作用，增大了培養(yǎng)液中藻種的濃度，來抑制其他雜藻及敵害生物的繁殖，減少藻液被污染的可能性。

四、接種時(shí)間

接種時(shí)間一般選擇在上午8：00~10：00之間進(jìn)行，不宜在晚上接種，因?yàn)橥砩喜簧僭孱惓猎诘撞?，而白天藻類進(jìn)行光合作用，趨光上浮，便于觀察其運(yùn)動(dòng)能力，還可起到選種的作用。

五、日常管理中應(yīng)注意攪拌

攪拌可促進(jìn)藻類的生長(zhǎng)繁殖，其作用主要是：

第一，通過攪拌增加水和空氣的接觸面，以補(bǔ)充由于藻類光合作用對(duì)二氧化碳的消耗；

第二，幫助沉淀的藻類細(xì)胞上浮而獲得光照；

第三，防止水表面產(chǎn)生菌膜。攪拌要定時(shí)進(jìn)行，且時(shí)常更換方向，以免造成漩渦式水流。同時(shí)攪拌不要太猛，防止藻液濺出。

光照調(diào)節(jié)光照適合與否，對(duì)培養(yǎng)藻類的生長(zhǎng)關(guān)系很大，目前生產(chǎn)單位都是利用自然光培養(yǎng)，但易變，所以，在培養(yǎng)管理中，必須根據(jù)天氣情況，調(diào)節(jié)光照強(qiáng)弱，力求光照強(qiáng)度盡可能適合于培養(yǎng)藻類的要求。晴天藻類室用白色的確良布作布簾遮光，防止直射強(qiáng)光照射；雨天光照最差，要把培養(yǎng)瓶盡量靠近窗口，有條件的可利用人工光源照射。

溫度調(diào)節(jié)每一種藻類都有其適應(yīng)溫度范圍和最適溫度范圍，但目前絕大多數(shù)單胞藻的培養(yǎng)還不具備控溫條件，只能順從自然溫度的變化，在不同季節(jié)選擇能適應(yīng)或基本適應(yīng)當(dāng)?shù)販囟茸兓瘲l件的培養(yǎng)種。

一般高溫對(duì)藻類生長(zhǎng)不利，在夏天進(jìn)行室內(nèi)培養(yǎng)須把門窗打開通風(fēng)降溫。

　　六、敵害防治

在單胞藻的培養(yǎng)中，敵害生物的污染和危害是造成藻類培養(yǎng)失敗的主要原因。對(duì)敵害生物應(yīng)“以防為主，防治結(jié)合”，盡可能減少其危害。預(yù)防措施預(yù)防應(yīng)貫穿在藻類培養(yǎng)過程的各個(gè)環(huán)節(jié)。

首先，力求藻種及營(yíng)養(yǎng)鹽的純度，控制源頭污染；

其次，海水須經(jīng)嚴(yán)格過濾消毒，器具及藻類培養(yǎng)池也需嚴(yán)格消毒，同時(shí)加大接種比例，抑制其他雜藻及敵害生物的繁殖，減少藻液被污染的可能性；

再則，在日常管理中，保持藻類室的干凈衛(wèi)生，以防灰塵及昆蟲等的污染。
消除、抑制或殺滅敵害生物方法：

一是使用過濾方法清除大型敵害生物。單胞藻都很小，對(duì)污染的大型敵害生物(如輪蟲等)，可以用過濾方法清除。通常清除輪蟲可用網(wǎng)孔小于60微米的篩絹過濾，經(jīng)一次過濾可以清除輪蟲的成體，而輪蟲卵和正在發(fā)育的幼小個(gè)體不能完全清除，所以必須連續(xù)過濾3天，每天1次。待第一次過濾后存留下來的卵和幼小個(gè)體發(fā)育成長(zhǎng)為成體后，在第二次或第三次過濾時(shí)清除掉。

二是使用藥物抑制或殺滅敵害生物。用于抑制或殺滅敵害生物的藥物，有化學(xué)藥品和中草藥兩大類。但往往由于敵害生物對(duì)藥物的抵抗力比培養(yǎng)藻類強(qiáng)，效果不理想。目前，有效的藥物方法還不多，藥物殺滅敵害生物雖然取得一些初步效果，但還需進(jìn)一步試驗(yàn)。

三是改變環(huán)境條件殺滅敵害生物。使用此法必須了解培養(yǎng)的藻類和敵害生物對(duì)生態(tài)因子的適應(yīng)范圍，然后根據(jù)具體情況，改變某一環(huán)境因素，達(dá)到殺滅敵害生物而又保存培養(yǎng)藻類的目的。

　　一、角毛藻、新月菱形藻、三角褐指藻

　　角毛藻、新月菱形藻、三角褐指藻都屬硅藻門。角毛藻又有多種，常用的主要是牟氏角毛藻。牟氏角毛藻屬?gòu)V溫廣鹽性藻類，在我國(guó)南方和北方均能培養(yǎng)，在水溫處于28℃～30℃，鹽度為30‰左右的條件下生長(zhǎng)最快，將硅藻培養(yǎng)液配方作為其培養(yǎng)液配方即可，若適量多加一些硅，其生長(zhǎng)速度會(huì)有明顯提高。而光照強(qiáng)度應(yīng)根據(jù)不同的級(jí)別培養(yǎng)和不同的藻種濃度進(jìn)行調(diào)節(jié)，如一、二級(jí)培養(yǎng)中應(yīng)避免直射光，光照不能太強(qiáng)，三級(jí)培養(yǎng)剛接種時(shí)弱光照射較好，當(dāng)濃度較大時(shí)可用直射強(qiáng)光照射，同時(shí)可適當(dāng)增加光照時(shí)間，一般可延長(zhǎng)2～3個(gè)小時(shí)。在一、二級(jí)培養(yǎng)時(shí)，光照過強(qiáng)時(shí)間過長(zhǎng)或溫度超過30℃時(shí)易使藻種變綠，此時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格控制光照強(qiáng)度、光照時(shí)間、溫度，必要時(shí)可降低培養(yǎng)液的鹽度，使其恢復(fù)正常。新月菱形藻、三角褐指藻適合生長(zhǎng)的溫度為15℃～20℃，超過28℃會(huì)死亡。不過，筆者曾將它們和金藻3011混合培養(yǎng)在31℃時(shí)也可以生長(zhǎng)，其濃度達(dá)60萬/ml。

　　二、金藻

　　養(yǎng)殖貝類常用的金藻有金藻3011、湛江叉鞭金藻、等鞭金藻，其適溫較廣，最適溫度為28℃～30℃，最適鹽度為25‰～32‰。金藻培養(yǎng)時(shí)應(yīng)加入適量的維生素和鐵以提高其生長(zhǎng)速度，在三級(jí)培養(yǎng)時(shí)，原生動(dòng)物繁殖極快，當(dāng)在100倍顯微鏡下觀察到每個(gè)視野有2個(gè)以上原生動(dòng)物時(shí)，藻液可在2天內(nèi)變成清水。因此，我們應(yīng)對(duì)用水、工具、培養(yǎng)池等嚴(yán)格消毒，并每天對(duì)藻種進(jìn)行鏡檢，對(duì)有少量污染的金藻及時(shí)投喂，對(duì)污染嚴(yán)重不能用的金藻應(yīng)先消滅原生動(dòng)物后方可排掉，以防對(duì)其它池造成污染。

　　三、小球藻和微球藻

　　小球藻、微球藻屬綠藻門，綠藻綱，屬?gòu)V溫、廣鹽性藻類。其本身具有抗污染特性，極易培養(yǎng)，在三級(jí)培養(yǎng)時(shí)，所用水可以不用消毒，用300目篩絹過濾即可，只是應(yīng)定期加入培養(yǎng)液以防老化，對(duì)污染嚴(yán)重的小球藻和微球藻可用一定濃度的漂白精對(duì)藻種進(jìn)行消毒，殺滅其原生動(dòng)物，待原生動(dòng)物殺死后再用硫代硫酸鈉還原，兩天后即可恢復(fù)正常。近幾年來，由于海水養(yǎng)殖業(yè)的大量興起，海水的水質(zhì)變化很大，特別是海水中的硅藻含量增加，給綠藻類的培養(yǎng)帶來很大難度。筆者在海南省水產(chǎn)研究所培養(yǎng)小球藻、微球藻過程中，碰到幾次當(dāng)藻種濃度很高時(shí)藻液在1小時(shí)內(nèi)快速變紅的現(xiàn)象，既使對(duì)用水嚴(yán)格消毒也沒效果，這種現(xiàn)象一般出現(xiàn)在每年的7月～9月，此時(shí)加入一定量的牙胞桿菌可使其恢復(fù)正常。

　　四、扁藻

　　扁藻屬綠藻門、綠藻綱，扁藻屬，也是極易培養(yǎng)的藻種之一，此藻種對(duì)鐵元素吸收量也較大，應(yīng)及時(shí)補(bǔ)充鐵元素以加速其生長(zhǎng)。在扁藻較高濃度時(shí)還可通過加入一定濃度的藥物對(duì)其提純、濃縮，低溫保藏，有需要時(shí)，可加入培養(yǎng)液再次培養(yǎng)。

　　五、在貝類藻種培養(yǎng)時(shí)還應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：

　　1、對(duì)用水、肥料、工具、培養(yǎng)池進(jìn)行嚴(yán)格消毒。

　　2、根據(jù)各海區(qū)海水的肥瘦添加適量的營(yíng)養(yǎng)鹽，加入低濃度營(yíng)養(yǎng)鹽可縮短藻類細(xì)胞的停滯期，后期追加營(yíng)養(yǎng)鹽可保持其指數(shù)生長(zhǎng)期。

　　3、及時(shí)調(diào)節(jié)光照、鹽度、溫度。根據(jù)藻種的不同濃度及時(shí)調(diào)整光照強(qiáng)度、光照時(shí)間，濃度較大時(shí)，可增強(qiáng)光照強(qiáng)度，延長(zhǎng)光照時(shí)間，對(duì)易發(fā)生藻種變異的藻類，在一級(jí)培養(yǎng)時(shí)調(diào)整其生長(zhǎng)鹽度和溫度是非常必要的。

　　4、根據(jù)不同的藻種用不同的藥物控制污染并待藻種濃度高時(shí)適時(shí)進(jìn)行濃縮、保藏以備不時(shí)之需。

　　5、一級(jí)培養(yǎng)時(shí)，盡可能在每次擴(kuò)種時(shí)，根據(jù)藻種的上浮、聚光特性進(jìn)行宏觀提純，以保證藻種的純度和活性。