課程內(nèi)容
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大家好，很高興今天能跟大家交流一下微藻的規(guī)模培育。規(guī)模培育在水產(chǎn)養(yǎng)殖方面現(xiàn)在主要運(yùn)用于大棚生物餌料方面（一定地點(diǎn)建立車間、濃縮之后近距離管道運(yùn)輸?shù)金B(yǎng)殖區(qū)域）、提取色素添加在飼料中，至于土塘潑灑，如何控制量、增氧和開口餌料這方面正在摸索，需要大家一起總結(jié)出經(jīng)驗(yàn)。今天我跟大家主要跟大家分享一下藻種的工廠化規(guī)模化培育。
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群里面應(yīng)該很多人都培育過藻，大家都知道藻種的培育分為一級、二級、三級培養(yǎng)，今天我是簡單從一級、二級、三級培養(yǎng)過程可能中遇到的問題、日常管理、接種、藻種營養(yǎng)配方這些方面做一下簡單的交流。
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因各地環(huán)境氣候、溫度、光照、水質(zhì)條件不同。不同季節(jié)、藻種性質(zhì)不同，單位水體養(yǎng)殖品種的需求量也不同。所以培養(yǎng)條件、營養(yǎng)鹽配方等各有不同。今天我主要是以金藻為例，引申出其他藻種的營養(yǎng)配方，讓大家學(xué)習(xí)一下其中的相似點(diǎn)。
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國內(nèi)大部分水產(chǎn)育苗企業(yè)，在育苗生產(chǎn)中都是自備微藻養(yǎng)殖設(shè)施，自行生產(chǎn)各類餌料用微藻。但是一般育苗場都普遍缺乏相應(yīng)的專業(yè)技術(shù)力量，只能利用各自的藻池和天然水體粗放培養(yǎng)，在餌料微藻種質(zhì)、生產(chǎn)技術(shù)和應(yīng)用方法上都各自為正，導(dǎo)致微藻種質(zhì)混亂、供應(yīng)不穩(wěn)定、營養(yǎng)成分不平衡、餌料效價(jià)低、缺乏多品種集約化生產(chǎn)應(yīng)用技術(shù)；同時(shí)，受限于微藻高密度養(yǎng)殖、采收技術(shù)和濃縮液保藏技術(shù)的限制，國內(nèi)幾乎沒有統(tǒng)一的、專業(yè)化的餌料微藻質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和集中供應(yīng)點(diǎn)。所以工廠化育苗需要及時(shí)的補(bǔ)充藻種，開口餌料非常重要。
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首先從工藝流程上來說
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一級培養(yǎng)：主要用于保種，主要用的儀器是錐形瓶，其能夠完全消毒，所以應(yīng)用在保種上面特別多。
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二級培養(yǎng)：主要是用塑料白桶（聚丙烯材料），生產(chǎn)上也用20L的飲水桶，但是瓶口小，操作不方便，消毒也不徹底；而用氧氣袋又易破裂。在南方經(jīng)常可以見到用玻璃制作的大型魚缸和氧氣袋。
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三級培養(yǎng)：主要有小型的10 m3、20 m3、30m3左右的室內(nèi)水泥池，采光良好，白色透明玻璃鋼瓦或塑料薄膜于車間頂部用于培育藻種。
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接下來我主要簡單的講一下容器和工具的洗滌、消毒。
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培藻過程中所有的容器和工具，比如錐形瓶、礦泉水桶、攪拌棒等必須經(jīng)過去污漬、肥皂等刷洗，之后再用消毒后的蒸餾水沖洗3-4遍。
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消毒的方法一般有加熱消毒法、化學(xué)試劑消毒法、紫外線消毒法。
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一般小型儀器用加熱消毒法，比如錐形瓶，方法是在錐形瓶瓶口放一培養(yǎng)皿，瓶中加水，煮沸，煮沸完之后，用牛皮紙或紗布包住，備用，這種方法能殺死營養(yǎng)體的部分芽孢。
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大型儀器、工具、培養(yǎng)池用化學(xué)藥品消毒（漂白粉、酒精、高錳酸鉀、鉻酸洗液等），漂白粉的有效氯含量一般是30-35%，漂白精的有效氯的含量是漂白粉的2倍，消毒時(shí)按1/10000-3/10000的含量配成水溶液，浸泡容器、工具半小時(shí)，再用消毒水沖洗3-4次（消毒水既是煮沸、沉淀、過濾其中的水）。
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水泥池的消毒可配成高濃度的漿糊狀漂白溶液，淋灑池壁，半小時(shí)后用消毒水沖洗干凈。也可以用較低含量的漂白粉進(jìn)行全池浸泡后，用消毒水沖洗，停放12小時(shí)后才可使用。
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酒精消毒一般用于人為操作，如在活化藻種、搖瓶或者攪拌的時(shí)候，涂抹手，消毒小的儀器上使用。酒精一般是配置成70-75%左右，殺菌效果是最顯著的，使生物蛋白脫水變性凝固，故有殺菌效果。
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海水的消毒，一般海水的消毒有過濾和加入化學(xué)消毒劑法。因?yàn)楹Ｋ局饕糜谌壟囵B(yǎng)，三級大規(guī)模培養(yǎng)時(shí)候主要用于殺滅有害生物，處理水必須無毒，對培養(yǎng)藻類的生長繁殖影響不大。水消毒必須簡單、經(jīng)濟(jì)、易行，不然大規(guī)模運(yùn)水特別多的時(shí)候培藻成本會加大。
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補(bǔ)充：消毒海水時(shí)可根據(jù)培養(yǎng)的目的和方式選用以下方法之一。
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1、加熱消毒法：經(jīng)沉淀、過濾的海水，一般加溫至90℃左右維持5分鐘或達(dá)到沸騰即可。由于海水中的一些對藻類生長有促進(jìn)作用的有機(jī)物在高溫時(shí)易遭破壞，所以加溫時(shí)間不宜太長。
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2、過濾除菌法：把經(jīng)沉淀的海水先經(jīng)砂濾，把大型生物和非生物雜質(zhì)去除，再用陶瓷過濾罐過濾，除去微小生物。
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3、次氯酸鈉消毒法：按每立方米海水20毫克有效氯的量加入次氯酸鈉溶液，充氣10分鐘后停氣，經(jīng)6~7小時(shí)消毒后，按每立方米水體25克的量加入硫代硫酸鈉，強(qiáng)充氣4~6小時(shí)，用硫酸-碘化鉀-淀粉溶液測試，若無余氯即可使用。
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4、紫外線消毒：有成型的紫外線消毒器可供選用。但此法不易殺滅較大的浮游動物。最好和過濾法結(jié)合使用。
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加熱消毒我們就不解釋了。
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主要是過濾除菌消毒，沉淀后的海水經(jīng)過紗慮池紗慮大型的生物及非生物雜質(zhì)出去，再經(jīng)陶瓷過濾罐過濾，除去微小生物，也可兩次紗慮，兩次紗慮也可以起到比較好的效果。
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漂白粉和漂白液消毒的時(shí)候，向水中加入漂白粉和漂白液，用硫代硫酸鈉中和余氯，中和余氯的過程以及操作流程的具體步驟如下：
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氯含量測定
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方法一
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硫代硫酸鈉滴定法
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需要的物品：
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1%碘化鉀溶液 （1 g溶于100ml水中）
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1.58%硫代硫酸鈉溶液 （1.58g溶于100ml水中 ）
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HCI 37%
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樣品溶于一定數(shù)量的水中的溶液（即稀釋一定倍數(shù)）
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程序
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在滴定瓶中加50ml碘化鉀溶液，0.25ml HCI 和1ml樣品溶液，這時(shí)候瓶中溶液應(yīng)該變?yōu)楹稚昧虼蛩徕c滴定，直到瓶中溶液變?yōu)槌吻澹]有顏色）。
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每ml硫代硫酸鈉可以中和3.55ppt的氯樣品溶液的氯濃度 = 硫代硫酸鈉的毫升數(shù)×3.55 ×100/1000（%） 樣品的氯含量=樣品溶液的氯濃度×樣品稀釋倍數(shù)
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方法二
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1. 試劑
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?。?）KI溶液：10%。
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?。?）淀粉溶液：0.5%。 稱取0.5克可溶性淀粉于小燒杯中，用少量水?dāng)噭蚝蠹尤?100ml的沸水中，加入后不斷攪拌，并煮沸至溶液透明為止。加熱時(shí)間不易過長且應(yīng)迅速冷卻，以免降低淀粉指示劑的靈敏性能。如需久存，可加入少量的HgI2或ZnCl2等防腐劑。
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（3）H2SO4溶液：2 mol/L。
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?。?）K2Cr2O7標(biāo)準(zhǔn)溶液：0.1000 mol/L。將K2Cr2O7在150-180℃烘干2小時(shí)，放入干燥器中冷卻至室溫。準(zhǔn)確稱取1.2258克于100ml燒杯中，加蒸餾水溶解后轉(zhuǎn)入250ml容量瓶中，用水稀釋至刻度充分搖勻。
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?。?）Na2S2O3溶液：0.1 mol/L。將12.5克Na2S2O3 ·5H2O溶解在500毫升新煮沸冷卻后的水中，加入0.1克碳酸鈉，儲于棕色瓶中并搖勻，保存于暗處一周后標(biāo)定使用。（低濃度的溶液需稀釋）
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?。?）丙二酸：20%溶液。
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2. 實(shí)驗(yàn)步驟
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?。?） 硫代硫酸鈉溶液的標(biāo)定
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用25毫升移液管吸取0.1000 mol/L重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液三份，分別置于250毫升碘量瓶中，加入5毫升6N鹽酸、5毫升20%KI，搖勻后在暗處放置約5min，待反應(yīng)完全，用100毫升水稀釋。用硫代硫酸鈉溶液滴定至溶液由棕色到綠黃色，加入2毫升0.5%淀粉指示劑，繼續(xù)滴定至溶液由藍(lán)色至亮綠色即為終點(diǎn)。根據(jù)消耗的硫代硫酸鈉溶液的毫升數(shù)計(jì)算其濃度。（低濃度的溶液標(biāo)定類似）
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?。?） 有效氯含量的測定
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取10毫升待測消毒溶液，置于250毫升碘量瓶中，加入2 mol/L 硫酸 10毫升，10%碘化鉀溶液10毫升，此時(shí)溶液出現(xiàn)棕色。蓋上蓋并振搖混勻后加蒸餾水?dāng)?shù)滴于碘量瓶蓋緣，在暗處放置約5min。打開蓋，讓蓋緣蒸餾水流入瓶內(nèi)。用硫代硫酸鈉溶液（裝于25毫升棕色滴定管中）滴定游離碘，邊滴邊搖勻，待溶液呈淺棕黃色時(shí)，加入10滴0.5%淀粉指示劑，溶液立即變藍(lán)色，繼續(xù)滴定至溶液由藍(lán)色至無色即為終點(diǎn)。記錄消耗的硫代硫酸鈉溶液的毫升數(shù)（V，ml）。 重復(fù)測3次，取3次平均值進(jìn)行以下計(jì)算。 因1 mol/L硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液
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營養(yǎng)鹽
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接下來說一下營養(yǎng)鹽的加法。以金藻為例，金藻的生長繁殖過程中必須每個(gè)營養(yǎng)元素都有一個(gè)最低量，如果低于這個(gè)最低量，生長繁殖則會受到抑制，如果某種營養(yǎng)的含量過高也會對藻類產(chǎn)生毒害作用，甚至死亡，因?yàn)楹窟^高會破壞滲透壓系統(tǒng)，讓藻脫水死亡。
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今天我跟大家說一下金藻的營養(yǎng)鹽，一般主要的營養(yǎng)鹽配方是F/2，營養(yǎng)鹽有大量元素、微量元素以及維生素，大量元素一般都是硝酸鈉（NaNO3）、磷酸二氫鈉（ NaH2PO4），微量元素有鋅（Zn）、錳（Mn）、鉬（Mo）、鈷（Co）、銅（Cu）、鐵（Fe），維生素有維生素B1（VB1）：主要是輔助糖類代謝，對能量起到積極的作用、維生素B12（VB12）：有利于鐵的利用，促進(jìn)代謝等發(fā)育成熟、維生素B6（VB6）：活化多種酶，有助于VB12的吸收等、生物素（VBH）：脂肪和蛋白正常代謝不可或缺的物質(zhì)，是一種維持生長、繁殖的營養(yǎng)素。
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培藻過程中如果是人工繁殖時(shí)，在光照、營養(yǎng)鹽、PH適合的情況它會非常大規(guī)模的繁殖。此時(shí)，水體中的二氧化碳會成為藻類繁殖的限制因子?，F(xiàn)在金藻和其它藻在人工繁殖的時(shí)候，碳源的補(bǔ)充是非常重要的，因?yàn)槠渌鼱I養(yǎng)鹽可以通過正交分解得出最優(yōu)的含量，而在藻體繁殖過程中光合作用需要大量的二氧化碳，從而導(dǎo)致碳源的需求量增大，這時(shí)根據(jù)情況人為補(bǔ)充碳源的話會起到非常好的繁殖效果，可通過氣石、攪拌等方式補(bǔ)充二氧化碳。
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培藻過程中如果是人工繁殖時(shí)，在光照、營養(yǎng)鹽、PH適合的情況它會非常大規(guī)模的繁殖。此時(shí)，水體中的二氧化碳會成為藻類繁殖的限制因子?，F(xiàn)在金藻和其它藻在人工繁殖的時(shí)候，碳源的補(bǔ)充是非常重要的，因?yàn)槠渌鼱I養(yǎng)鹽可以通過正交分解得出最優(yōu)的含量，而在藻體繁殖過程中光合作用需要大量的二氧化碳，從而導(dǎo)致碳源的需求量增大，這時(shí)根據(jù)情況人為補(bǔ)充碳源的話會起到非常好的繁殖效果，可通過氣石、攪拌等方式補(bǔ)充二氧化碳。
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培養(yǎng)金藻的時(shí)候，一般一、二級用康維方，康維方一般基于F/2配方基礎(chǔ)上的一個(gè)配方，而三級培養(yǎng)的時(shí)候用金藻培養(yǎng)液。
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金藻培養(yǎng)液：硝酸鈉溶液：磷酸二氫鉀溶液：檸檬酸鐵氨=100：10：1，1000ml滅菌海水。
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在三級培養(yǎng)的時(shí)候，營養(yǎng)鹽的添加都是1:1000的添加，就是1毫升的營養(yǎng)鹽添加到1L的水體中。在生產(chǎn)時(shí)可以為了生產(chǎn)等便利，可以放大配方比例，在大規(guī)模的培養(yǎng)中1：10000的添加也是可以的。實(shí)驗(yàn)結(jié)果當(dāng)然是1:1000最好，但是實(shí)驗(yàn)和實(shí)際生產(chǎn)中肯定有一定的誤差，在實(shí)際生產(chǎn)中1:10000也可以正常的培育出高密度的金藻。當(dāng)然在大規(guī)模的培養(yǎng)中1：10000的添加，起到的效果稍微差一點(diǎn)，但也不會差到哪里去。
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接種
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接下來就是接種，接種其實(shí)也是一個(gè)很簡單的操作，接下來我簡單說明下。
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金藻在二級培養(yǎng)（高密度擴(kuò)大培養(yǎng)的時(shí)候），能達(dá)到700——800萬個(gè)cell/ML，扁藻能達(dá)到100——150萬個(gè)cell/ML，小球藻也能達(dá)到1000萬個(gè)cell/ML。
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接種就是把作為藻種的藻液接入新配好的培養(yǎng)液中，進(jìn)行豐富培養(yǎng)。
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接種的過程雖然簡單，但要注意藻種的質(zhì)量、藻種的密度、接入藻液的數(shù)量以及接種的時(shí)間等問題。
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藻種的質(zhì)量我們可以根據(jù)藻細(xì)胞運(yùn)動、附壁、沉淀、鏡檢顏色，觀察它的質(zhì)量好壞。金藻是金褐色，硅藻是呈黃褐色，綠藻是鮮綠色，有運(yùn)動能力會上浮，沒有運(yùn)動能力均勻漂浮在水中。
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附壁和沉淀：好的藻種一般沒有明顯的附壁，如果藻種受到環(huán)境因子等各方面的不適宜條件的時(shí)候，會大量的聚集沉淀。
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鏡檢的時(shí)候一般都是觀察顏色和運(yùn)動，有無雜藻，有無大的原生動物和蟲子，水體中的藻種是否過關(guān)。
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接藻的時(shí)候，金藻培育從二級向三級接的時(shí)候，金藻藻細(xì)胞達(dá)到250萬/毫升的時(shí)候就可以接種了。
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一級培養(yǎng)或小型培養(yǎng)可以是1:2或者1:3的接種，二級培養(yǎng)或生產(chǎn)培養(yǎng)可以是1:10、1:20、1:40的接種也可以正常生長。剛說的這些，1:20不清楚，我舉一些簡單的例子，假設(shè)5000Ml的錐形瓶，培養(yǎng)5000ML的藻液，可以接種1個(gè) 20L的礦泉水桶，3個(gè)20L的礦泉水桶可以接種1m3的保種池，1m3米的保種池可以接種2個(gè)5m3的生產(chǎn)池。
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接種時(shí)間一般選擇在早上的8:00——10:00，這時(shí)候選擇接種是因?yàn)樵弩w的活性隨著光照、環(huán)境溫度的上升，活性是最好的，接種的時(shí)候它能夠快速的進(jìn)入到指數(shù)生長期。
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培養(yǎng)工藝，金藻培養(yǎng)有一次性施肥、混合營養(yǎng)鹽的施肥和碳酸氫鈉分批次的施肥。金藻在國內(nèi)現(xiàn)在應(yīng)該是開放式半連續(xù)培養(yǎng)。
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日常管理
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日常管理是非常重要的一塊，跟消毒一樣。比如你培養(yǎng)了30m3的水池，如果你培養(yǎng)時(shí)從顏色等感覺還行，突然之間有可能全部死亡，可能是你日常管理不規(guī)范、不細(xì)致，引起雜菌繁殖和無法探知的原因?qū)е屡囵B(yǎng)的藻體全部死亡。
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首先日常管理的第一步，攪拌和充氣，就像一級培養(yǎng)，一級培養(yǎng)就是保種，我會在保種間每天3次（早、中、晚）搖晃錐形瓶，使其均勻分布，不會粘黏器壁。二級培養(yǎng)需要增加氣石來補(bǔ)充二氧化碳的量，或者搖晃容器。三級培養(yǎng)需要攪拌棒和氣石給金藻補(bǔ)充二氧化碳搖晃、攪拌和充氣一般都是補(bǔ)充二氧化碳，防治藻之間產(chǎn)生菌膜，還有均勻受光、池底、礦泉水桶里面的藻類上浮獲得光照。
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攪拌充氣最好每天定時(shí)進(jìn)行三次，每次大約在半分鐘左右就可以了。
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調(diào)節(jié)光照這塊，一般的藻類不能忍受強(qiáng)烈的直射光照，車間頂部一般都是用透明玻璃鋼瓦采光。光弱的時(shí)候需要增加人工的光源，如日光燈、碘鎢燈。
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根據(jù)藻種所需的最適光照強(qiáng)度范圍，1w的燈大概是12.6Lx左右的能量，像金藻需要的最適光照強(qiáng)度（球等鞭金藻7000-9000，湛江等邊金藻5000-11000）可以根據(jù)燈光計(jì)算出來所需多少瓦燈，直接補(bǔ)充多少的光照就可以正常生長。
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高溫不利于生長，夏季室內(nèi)培養(yǎng)的時(shí)候一般需要通風(fēng)降溫，通風(fēng)降溫在北方一般夏季用風(fēng)扇，北方冬天氣溫低，一般室外也不能培養(yǎng)，室內(nèi)一般采取水暖、氣暖等措施來供暖。
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有條件的車間，會在天窗加蓋紗窗布，防止蚊蟲進(jìn)入，在藻體的水體中產(chǎn)卵。如果發(fā)現(xiàn)其產(chǎn)卵或昆蟲的尸體，需要及時(shí)撈掉。刮大風(fēng)的時(shí)候要盡量避免泥土、雜物等吹入培養(yǎng)池、因?yàn)槟嗤晾锩婧写罅康募?xì)菌等。
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生長情況
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最后一般都是生長情況的觀察。
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生長情況的觀察首先是觀察顏色。金藻生長良好時(shí)呈金褐色。接種后，隨著藻類的細(xì)胞濃度逐漸增加，正常情況顏色由淺變深。若顏色由深變淺則可能是由于環(huán)境因子不適宜引起的；若出現(xiàn)其他顏色，如藍(lán)色、黃色、乳白色等，說明被其它污染了。
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藻體顏色保持原色的時(shí)候說明藻體沒有死亡，可能還在休眠，藻體是有自我保護(hù)機(jī)制得，有可能是環(huán)境因子導(dǎo)致藻體自我保護(hù)了，如果環(huán)境較好的時(shí)候，活化一下，藻種還能正常生長。但如果藻體變成灰白色說明藻體已經(jīng)開始死亡、腐敗。
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接下來從藻種的運(yùn)動和沉淀來看，金藻在顯微鏡下觀察時(shí)有鞭毛，但運(yùn)動緩慢，一般不會迅速上浮，而是形成趨光帶，細(xì)胞群成線狀上浮。當(dāng)環(huán)境不適時(shí)，藻類會下沉形成沉淀，當(dāng)環(huán)境變好時(shí)則上浮。如果在環(huán)境條件正常時(shí)藻液大量沉底，出現(xiàn)沉淀，而且經(jīng)過攪拌后又很快下沉，則是不正?，F(xiàn)象。沉淀藻體的顏色如果保持原色，說明還沒有死亡，有可能恢復(fù)正常生長。如果藻體變成灰白色，則藻類已死亡。這就是我剛才說的藻體顏色判斷時(shí)候可能出現(xiàn)的情況。造成藻類沉淀的原因是多方面的，但主要的原因是環(huán)境不良或營養(yǎng)不足使藻類的生長受到抑制。
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還有一個(gè)附壁現(xiàn)象，金藻我在培養(yǎng)的時(shí)候很少出現(xiàn)附壁現(xiàn)象，我在培養(yǎng)的時(shí)候扁藻、綠藻很容易出現(xiàn)附壁，聚集成團(tuán)之后沉底的情況。如果聚集沉淀有可能是菌膜，即生物污染物（有細(xì)菌大量繁殖的時(shí)候，藻細(xì)胞可由菌膜互相粘黏而形成團(tuán)塊狀）。
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最后一步就是藻體培育成功之后的采收，采收現(xiàn)在一般都是用水泵直接抽取藻液，然后進(jìn)行超濾過濾，最后收集濃縮藻液。現(xiàn)在的濃縮技術(shù)有抽濾、聚沉、上浮等。
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單胞藻營養(yǎng)配方
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最后我跟大家分享一下幾個(gè)單胞藻的一些營養(yǎng)鹽配方。配方來自于中國科學(xué)院海洋研究所海洋生物種質(zhì)庫真實(shí)性有待考證。
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一、常規(guī)藻類配方
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1、一般用培養(yǎng)液配方
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NaNO3 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 0.03克
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CO（NH2）2 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?0.03克
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KH2PO4 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?0.005克
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FeC6H5O7（1%溶液） ? ? ? ? ? ? ? 0.2毫升
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維生素B1 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?200微克
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維生素B12 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 200毫微克
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人尿 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 1.5毫升
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海水 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?1000毫升培養(yǎng)
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綠藻、金藻、硅藻使用，培養(yǎng)硅藻時(shí)添加0.02克/升硅酸鈉。
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2、綠藻培養(yǎng)液配方
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2.1 ?海洋3號扁藻培養(yǎng)液
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NaNO3 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?0.1克
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KH2PO4 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 0.01克
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Fe（SO4）3 ?（1%溶液） ? ? ? ? ? ? ? 10滴
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2Na3C6H5O7 ?11H2O ? ? ? ? ? ? ? ?0.02克
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海水 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 1000毫升
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2.2 ?亞心形扁藻培養(yǎng)液
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NaNO3 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?0.05克
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KH2PO4 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 0.005克
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FeC6H5O7 ?（1%溶液） ? ? ? ? ? ? ?0.2毫升
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維生素B1 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?200微克
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維生素B12 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 200毫微克
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人尿 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 2毫升
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海水 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 1000毫升
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3、硅藻培養(yǎng)液配方
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3.1、湛江水產(chǎn)學(xué)院硅藻培養(yǎng)液
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NaNO3 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 0.08克
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KH2PO4 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?0.008克
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FeC6H5O7 ?（1%溶液） ? ? ? ? ? ? ?0.2毫升
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Na2SiO3 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 0.02克
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維生素B1 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 200微克
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維生素B12 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?200毫微克
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人尿 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?1.5毫升
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海水 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?1000毫升
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培養(yǎng)三角褐指藻、小新月菱形藻、鈣質(zhì)角毛藻、牟氏角毛藻。
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3.2、中肋骨條藻培養(yǎng)液
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KNO3 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 0.4克
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Na2HPO4 ?2H2O ? ? ? ? ? ? ? ? ?0.04克
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K2SiO3 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?0.02克
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Fe（SO4）3 ?7H2O ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?0.014克
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土壤提取液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?15毫升
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“920”植物生長激素 ? ? ? ? ? 4~5國際單位
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海水 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 1000毫升
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3.3 ?牟氏角毛藻配方
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NH4NO3 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?5~20毫克
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KH2PO4 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?0.5~1毫克
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FeC6H5O7 ?3H20 ? ? ? ? ? ? ? ? 0.5~2毫克
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海水 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 1000毫升
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4、金藻培養(yǎng)液配方
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4.1 ?“f /2”培養(yǎng)液
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NaNO3 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 74.8毫克
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NaH2PO4 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 4.4毫克
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Na2SiO3 ?9H2O ? ? ? ? ? ? ? ? ? 8.4~16.7毫克
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f /2微量元素溶液 ? ? ? ? ? ? ? ? ?1毫升
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f /2維生素溶液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?1毫升
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海水 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?1000毫升
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4.2 ?等鞭金藻OA-3011培養(yǎng)液（陳椒芬等）
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NaNO3 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 0.06克
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K2HPO4 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?0.004克
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FeC6H5O7 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 0.5毫克
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Na2SiO3 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 0.005克
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維生素B1 ? ? ? ? ? ? ? ? ? 100~500微克
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維生素B12 ? ? ? ? ? ? ? ? ?0.5~1.5毫克
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NaHCO3 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 1克
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海水 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?1000毫升
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二、微量元素溶液配方
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1、A5-B6微量元素溶液配方A5：
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H3BO3 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 2.86克
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MnCl2.4H2O ? ? ? ? ? ? ? ?1.81克
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ZnSO4.7H2O ? ? ? ? ? ? ? ?0.22克
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CuSO4.5H2O ? ? ? ? ? ? ? ?0.08克
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Na2MoO4 ? ? ? ? ? ? ? ? ?0.021克純
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水 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?1000毫升
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H2SO4 （濃） ? ? ? ? ? ? ? ? 1滴
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B6NH4VO3 ? ? ? ? ? ? ? ? ? 229.6毫克
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Cr2（SO4）4.24H2O ? ? ? ? ? ?960.2毫克
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NiSiO4.6H2O ? ? ? ? ? ? ? 447.8毫克
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Co（NO3）2.6H2O ? ? ? ? ? ? 493.8毫克
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Ti溶液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 20毫升
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0.2摩爾/升 H2SO4 ? ? ? ? ? 1000毫升
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Ti溶液配法：把736.6克草酸鈦溶解于少量純水中，加入氫氧化銨使成堿性，發(fā)生沉淀。用離心機(jī)將沉淀集中，用0.2摩爾的硫酸20毫升溶解。用量：每1000毫升培養(yǎng)液中加入A5、B6溶液各1毫升。
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2、“f /2”微量元素溶液
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ZnSO4.4H2O ? ? ? ? ? ? ? ?23毫克
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MnCl2.4H2O ? ? ? ? ? ? ? 178毫克
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CuSO4.5H2O ? ? ? ? ? ? ? ?10毫克
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FeC6H5O7.5H2O ? ? ? ? ? ? ? 3.9克
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Na2MoO42H2O ? ? ? ? ? ? ?7.3毫克
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CoCl2.6H2O ? ? ? ? ? ? ? ? 12毫克
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Na2EDTA ? ? ? ? ? ? ? ? ? 4.35克
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純水 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?1000毫升
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每1000毫升培養(yǎng)液加1毫升。
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三、維生素溶液配方
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1、維生素溶液S3
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硫胺素鹽酸鹽 ? ? ? ? ? ? ? ?0.05克
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尼古丁酸（煙酸） ? ? ? ? ? ?0.01克
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泛酸鈣 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?0.01克
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對氨安息香酸 ? ? ? ? ? ? ? ? 1.0克
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維生素H ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 0.1
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克肌醇 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 0.5
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克葉酸 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?0.2
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微克胸（腺）間氮苯 ? ? ? ? ? ? ? 0.3克
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純水 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 1000毫升
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每1000毫升培養(yǎng)液中加入1毫升。
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2、“f /2”微生素溶液
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維生素B12 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?0.5毫克
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維生素B1 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 100毫克
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維生素H ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?0.5毫克
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純水 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 1000毫升
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1000毫升培養(yǎng)液中加入1毫升。
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現(xiàn)在很多情況下我們都是藻種培養(yǎng)規(guī)模培育之后，很多人希望運(yùn)用到土塘培養(yǎng)方面，土塘水質(zhì)調(diào)控、開口餌料等方面（單位幼苗生物餌料投喂量），但是給土塘如何潑灑、如何控制那個(gè)量，起到最好的增氧效果方面，我在天津做的時(shí)候我的一個(gè)老師建議我別往這方面做，因?yàn)楦鞯丨h(huán)境因子等不同，在室外培養(yǎng)受到天氣、氣候等的影響，不利于培養(yǎng)。
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所以我只是以金藻為例，把培育藻的簡單的操作和需要注意的一些點(diǎn)跟大家交流一下，希望有能力、有想法的、自己想做的可以往土塘方面發(fā)展，因?yàn)閭€(gè)人能力有限，各地情況不同，我也總結(jié)不了這么多東西。
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互動環(huán)節(jié)
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1、小球藻在室外，簡易培養(yǎng)是否可行？培養(yǎng)好后是否可以直接給貝類投喂？小球藻的配方？小球藻在培養(yǎng)過程當(dāng)中會不會把青苔種也培養(yǎng)起來了？
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室外培養(yǎng)是可行的。現(xiàn)在也有人在做，我也想往這方面做，室外培養(yǎng)一般是開放池培養(yǎng)，設(shè)備簡單一點(diǎn)，技術(shù)含量也低，投資也少，但是產(chǎn)量會低一些，容易受到自然環(huán)境的影響。
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苗種易消化吸收，可以通過水的過濾，吸收水體中的小球藻。小球藻的配方一般都是SE培養(yǎng)基，PR培養(yǎng)基、Bg-11培養(yǎng)基（Bg-11培養(yǎng)基培養(yǎng)藍(lán)藻用的），這幾個(gè)培養(yǎng)跟F/2培養(yǎng)基十分相似。
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現(xiàn)在我做的一般都是工廠化室內(nèi)水泥池的大規(guī)模培養(yǎng)，沒有遇到過把青苔的培養(yǎng)起來的情況。
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2、你好，老師，我想咨詢用濃縮藻液小球藻大規(guī)模擴(kuò)培小球藻方面的知識，如何防蟲殺蟲？抑制雜藻的生長，還有就是關(guān)于小球藻液保存方面的問題，除了低溫保存，可不可以添加某些試劑讓其不下沉不大量死亡呢？
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濃縮方面的介紹，擴(kuò)培小球藻操作類似于金藻，因?yàn)槿焓枪S化大規(guī)模擴(kuò)培，很少出現(xiàn)雜藻。在大規(guī)模擴(kuò)培的時(shí)候，從二級向三級擴(kuò)培，小球藻已經(jīng)成為優(yōu)勢種群，小球藻會產(chǎn)生抗生物質(zhì)，會抑制其它雜藻、菌的繁殖，因?yàn)槲沂亲鰯U(kuò)培方面的，只要我殺菌消毒比較徹底的情況下，就很少有雜藻、蟲等的出現(xiàn)。
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如果是保存，循環(huán)移液保存法，方法很簡單，而且保存的藻種活力強(qiáng)，純度高。但保存的量跟儀器的數(shù)量有關(guān)。
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具體的操作：把藻液在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)（差不多10天或者7天），把藻種過濾到消毒海水之后，再保存，也就是循環(huán)移液的保存，保存的時(shí)間比較長，一般學(xué)校實(shí)驗(yàn)室的藻種都是循環(huán)移液保存，但僅是保存藻種，而大規(guī)模的保存現(xiàn)在用的是買藻種保存的方法（濃縮低溫保存法）。
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至于添加某個(gè)試劑讓其不下沉不大量死亡，我沒有做過，因?yàn)槲沂侵苯釉谟鐝S或者苗場附近，建立車間，直接規(guī)模培藻之后，直接運(yùn)輸，濃縮方面是非常方便的，在建廠設(shè)計(jì)方面已經(jīng)設(shè)計(jì)好了的。
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3、小球藻培養(yǎng)方式與如何控制藻相？
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小球藻的培養(yǎng)方式，類似金藻的培養(yǎng)方式（剛才以金藻為例，就是這個(gè)原因）。
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至于藻相的控制，如果是土塘則不希望一次肥水，一次肥水很容易肥水過量，因?yàn)樵宸N肥育起來特別迅速之后很容易倒藻，所以希望分批次的添加，而少量多次的添加，控制藻相可以給蝦、魚苗補(bǔ)充開口餌料，為水體補(bǔ)充氧，又能降解氨氮、亞鹽等，這是一個(gè)養(yǎng)殖經(jīng)驗(yàn)的積累。
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工廠化方面的育苗根據(jù)養(yǎng)殖密度等綜合條件判斷添加的數(shù)量。工廠化培育的時(shí)候，因?yàn)榭梢灾苯铀愠?L水體中有多少藻細(xì)胞，添加多少藻細(xì)胞不會導(dǎo)致水質(zhì)等各方面出現(xiàn)問題，這方面也是一個(gè)經(jīng)驗(yàn)的把控。
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4、培水穩(wěn)水水體通常該補(bǔ)充哪些微量元素，比例是多少，時(shí)間間隔等有沒有一個(gè)相對可操作的模式？
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通常補(bǔ)充的微量元素，就跟我剛才發(fā)的配方一樣，一般都是F/2微量元素，F(xiàn)/2微量元素一般都是鋅、錳、銅、鐵、鉬、鈷。對于具體比例，不同的藻的含量不一樣，如果綜合了好幾種藻的話，所需最佳量取一個(gè)最佳值，如果是單個(gè)藻種培養(yǎng)可以直接有微量元素的比例。
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現(xiàn)在就像我說的那種，培養(yǎng)工藝上，培養(yǎng)的時(shí)候直接一次性添加，把營養(yǎng)鹽起始就添加完畢；或者就是混合營養(yǎng)鹽添加，前批次添加像大量元素磷酸二氫鉀，硝酸鈉，之后再添加（如果培養(yǎng)硅藻的話）硅酸鈉或者碳酸氫鈉等，也可以用碳酸氫銨代替碳酸氫鈉加入。
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所謂時(shí)間間隔，微量元素一般都是一次性添加，計(jì)算單位水體需要添加多少，目前都是這么添加的。
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5、綠藻，硅藻，隱藻，甲藻的生命周期是多少天。藻毒素是怎么產(chǎn)生的。
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藻細(xì)胞具體的生命周期我不知道，如果生存環(huán)境適宜了，能夠延長指數(shù)生長期十幾天，如果把培養(yǎng)藻的模式變成連續(xù)培養(yǎng)，一邊補(bǔ)充水體的營養(yǎng)鹽和添加消毒過的海水，一邊取出藻液，可以連續(xù)生長，連續(xù)生長的時(shí)候，藻細(xì)胞會分裂生殖，所以我也不知道它具體是多久。
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藻毒素就是藻體死亡的時(shí)候，藻細(xì)胞若不能及時(shí)的被分解，釋放的物質(zhì)應(yīng)該就是藻毒素。
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6、土塘中及水泥池中硅藻的培育簡便配方。
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如果是簡單的硅藻水池培育的話一般，硝酸銨/磷酸二氫鉀/硅酸鈉=10/1/2于1000ML消毒海水中，這是個(gè)比例。期間可以添加維生素VB1:100mg ?VB12：1mg ?VH生物素：1mg。
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7、培藻過程中如何有效控制黃綠菌以及原生動物？
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有微生物制劑可以控制黃綠菌數(shù)量，因?yàn)槲覍@塊不是很了解，可以請教其他高手，我在試驗(yàn)、生產(chǎn)中消毒一般很少遇到。
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8、硅藻（海鏈藻、角毛藻）的最高耐受溫度是多少？
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角毛藻最高耐受溫度應(yīng)該是30度，海鏈藻我不清楚。
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9、對藻類進(jìn)行離心濃縮會破壞其組織和營養(yǎng)嗎？
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對藻類進(jìn)行離心濃縮會減少其營養(yǎng)含量，像脂肪酸、蛋白質(zhì)，假設(shè)含50%，會減少到40%，但是對組織的破壞一般不會，現(xiàn)在離心濃縮，在國內(nèi)運(yùn)用最廣泛，其優(yōu)越性不言而語，破壞的話就不會在國內(nèi)廣泛應(yīng)用的。
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10、藻類濃縮部分的相關(guān)咨詢
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?1、微藻濃縮抽濾是如何實(shí)現(xiàn)的？
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現(xiàn)在有超濾技術(shù)濃縮，過濾工具“板框式超濾器”，壓力泵，不銹鋼容器（20L），不銹鋼管路，冷卻系統(tǒng)。
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超濾是一項(xiàng)新型的膜分離技術(shù)，它以膜兩側(cè)的壓力差為推動力，在被處理料液流經(jīng)表面具有微小孔徑的不對稱結(jié)構(gòu)超濾膜時(shí)，實(shí)現(xiàn)不同分子量物質(zhì)的分離等物理分離過程。
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還有一個(gè)是離心，國內(nèi)應(yīng)用最廣泛的。
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氣浮和沉降：用明礬、氯化鐵對藻細(xì)胞起絮集、凝集、沉降的那種，把藻液分離之后收集
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抽濾濃縮怎么做？找制作的廠家，直接看說明書制作就行。
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2、抽濾以后是什么樣子，泥？膏？液體？
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用機(jī)器抽濾完之后有一層膜，像膏也像軟泥。
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3、抽濾以后怎么保存，可以保持多久活性
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藻細(xì)胞保存的方式速凍和緩慢的漸凍有關(guān)，這兩種方式會對藻細(xì)胞的營養(yǎng)物質(zhì)造成一些損失，一個(gè)能夠把藻細(xì)胞的營養(yǎng)物質(zhì)保存一95%一個(gè)是80%多（假設(shè)量），所以這個(gè)看要保存多久和各方面綜合選擇你要保存的方式，個(gè)人用途不同，有些人用藻是做餌料，有些是長途運(yùn)輸做藻種，就看具體的用途來保存。濃縮保存3個(gè)月后進(jìn)行再培養(yǎng)試驗(yàn)，其生長曲線與標(biāo)準(zhǔn)再生長曲線相似，但曲線中延緩期稍長，可能由于濃縮液中營養(yǎng)鹽濃度相對較低的緣故。
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4、濃縮藻 金藻 硅藻 扁藻都有嗎
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金藻現(xiàn)在普遍都是細(xì)胞低溫保存技術(shù)，是可以濃縮的。扁藻也有濃縮的，像超濾濃縮但是硅藻我沒有用過濃縮，所以不是很清楚，按照其他藻種濃縮，理論可以。
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11、海水藻類如何控制細(xì)菌感染和細(xì)胞密度的問題
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我所知道的，我做的時(shí)候是做到無菌操作，當(dāng)然也要看藻種，有些藻種是需要細(xì)菌協(xié)同的，需要菌來刺激它，才能相互生活得更好，大部分藻種有菌之后會產(chǎn)生拮抗抑制，協(xié)同的有個(gè)骨條藻，蟶的在開口餌料里面就是骨條藻。
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當(dāng)然細(xì)菌控制的時(shí)候我的操作一般都是，我在操作實(shí)驗(yàn)和生產(chǎn)實(shí)踐的時(shí)候，首先對口罩、手套經(jīng)過70%的酒精消毒，還有就是各方面的藥品都有消毒，盡量做到無菌操作。
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控制細(xì)胞密度，這個(gè)密度如果是土塘、工廠化育苗的話，育苗池的密度可以通過進(jìn)水、排水的方法控制?？刂泼芏鹊姆椒ê唵尉湍菐追N。我做的是規(guī)模化爆發(fā)的增長，所以很少會想到控制生長，只能想到進(jìn)水排水這種了。
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細(xì)菌方面我盡量做到無菌操作，我對細(xì)菌這方面了解比較少，我盡量操作規(guī)范使細(xì)菌少地點(diǎn)，這樣提高成功率。
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12，用次氯酸鈉消毒海水怎樣中和余氯？若果我1噸的水消毒后中和用的硫代硫酸鈉剛好是20克，那么中和前的有郊氯是多少？若過量的硫代硫酸鈉對藻類影響大嗎？過量到什么程度才會造成大有影響？
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這個(gè)比較專業(yè)性，如果是硫代硫酸鈉剛好是20克應(yīng)該是中和前有效氯16克一立方水體中，過量肯定會造成影響。我在上面已經(jīng)發(fā)一個(gè)硫代硫酸鈉的余氯測試的操作過程，大家可以看看。我很少碰到過量的情況。影響肯定有。
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13、海洋微藻養(yǎng)殖單獨(dú)作為獨(dú)立產(chǎn)業(yè)如何發(fā)展？例如，小球藻可以作為保健品。國內(nèi)目前的海洋微藻產(chǎn)業(yè)發(fā)展?fàn)顩r？
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這個(gè)問得有點(diǎn)大了，這個(gè)方面需要大家共同探討，現(xiàn)在已經(jīng)作為獨(dú)立的產(chǎn)業(yè)發(fā)展了，在印度、英國、日本、新加坡和臺灣等把藻作為保健食品，食品添加劑、色素和應(yīng)用醫(yī)療方面、水產(chǎn)餌料和處理污水方面也有，我在大學(xué)的時(shí)候有學(xué)過石油泄漏的時(shí)候用培養(yǎng)藻種分解石油，防治污染水體，改善水產(chǎn)養(yǎng)殖水體的環(huán)境，當(dāng)然還有一個(gè)重要的就是培養(yǎng)燃料，藻類可以代替燃料，是可以發(fā)展的，國家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃（973計(jì)劃）好像都有提及這方面?，F(xiàn)在這方面正在發(fā)展，還不是很規(guī)范。
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14、能不能定向培養(yǎng)小球藻來用于養(yǎng)殖，怎樣保持，日常怎樣管理，密度不用高，水體透明度40公分，怎樣保持30天。
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室外養(yǎng)殖定向培藻是絕對可以的，怎么保持日程管理和密度不高，因?yàn)樾∏蛟宓姆至阉俣人阕羁斓牧?，活性非常?qiáng)，很難管控，造成在水產(chǎn)養(yǎng)殖中很少有大規(guī)模的繁殖，因?yàn)榉敝扯嗔丝隙〞斐傻乖?，如果想要控制好要小范圍試?yàn)，分批添加小球藻，營養(yǎng)鹽等，目前我的水平保證不了穩(wěn)定30天。
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海南有說卵囊藻在水中穩(wěn)定生存20天左右。卵囊藻往這方面正在運(yùn)用，也有產(chǎn)品在市面流通。為什么不用小球藻，就是因?yàn)楝F(xiàn)在小球藻根本控制不來，你想想養(yǎng)一造蝦3個(gè)月，如果連續(xù)2-3次穩(wěn)定30天，結(jié)果非?？捎^了。
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小球藻定向培藻，我想往土塘這塊發(fā)展，所以我在天津這塊在弄，今天講這個(gè)就是希望有這個(gè)基礎(chǔ)配方，想自己嘗試的，可以自己來總結(jié)經(jīng)驗(yàn)。不用一次性定向培藻過多，而是多次分批次的添加，掌握一些經(jīng)驗(yàn)再相互學(xué)習(xí)交流。
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15、能否提供一個(gè)淡水三級培育小球藻的配方
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小球藻，Bg-11培養(yǎng)基，我在學(xué)校的時(shí)候用過，它主要用于培養(yǎng)藍(lán)藻，但它可以是淡水培養(yǎng)應(yīng)用的，也可以海水培養(yǎng)小球藻，這些你可以嘗試一下，
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16、1L水體應(yīng)有多少的藻細(xì)胞為合適？是指藻細(xì)胞的生物量嗎？您改良的配方給大家分享一下好么？
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1L水體應(yīng)有多少的藻細(xì)胞為合適？你養(yǎng)的品種（魚蝦、扇貝，品種）不一樣，單位水體需要的藻類細(xì)胞肯定不一樣，各地環(huán)境差異，所以各地是不一樣的。改良配方我剛才給大家的配方是可以培養(yǎng)金藻這類的。