藻類計(jì)數(shù)和生長(zhǎng)曲線的制作方法

綜合一些資料和經(jīng)驗(yàn),介紹接種藻類計(jì)數(shù)的方法,以扁藻為例介紹幾種計(jì)數(shù)方法和生長(zhǎng)曲線制作方法

1、細(xì)胞計(jì)數(shù)法
計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法:混勻藻液,取出一定量的藻液,滴入一滴甲醛固定扁藻細(xì)胞,用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),每個(gè)樣品須重復(fù)測(cè)定3次,計(jì)算每毫升藻液所含細(xì)胞數(shù)的平均值。每毫升藻液所含的細(xì)胞數(shù)(細(xì)胞密度)按下式計(jì)算:
每毫升藻液細(xì)胞數(shù)=計(jì)數(shù)平均值×10,000×稀釋倍數(shù) (2-1)
2、干重法
取一定體積的藻液,用玻璃纖維濾紙(Whatman GF/C)過濾獲得藻細(xì)胞沉淀,將沉淀放入80℃烘箱中烘干至恒重,稱量,藻細(xì)胞的質(zhì)量即等于稱量結(jié)果減去濾紙的質(zhì)量。
3、光密度法
混勻藻液,取3 ml藻液放入1 cm光徑比色皿中,以不含扁藻細(xì)胞的培養(yǎng)基為空白對(duì)照,在Jasco V-530型紫外可見分光光度計(jì)下取其特征吸收峰測(cè)定OD值(綠藻一般為680,665,450 nm)。

先稀釋出不同濃度的藻液,用分光光度計(jì)測(cè)定其吸光度值,然后根據(jù)各組數(shù)據(jù)生成工作曲線,之后就只用測(cè)吸光度了。關(guān)鍵還是要選擇合適的波長(zhǎng),培養(yǎng)液最好不要有雜色。硅藻含類胡蘿卜素較多,用440nm就可以。

?750nm可以排除葉綠素和類胡蘿卜素的干擾。

吸光度測(cè)出來數(shù)據(jù)要求跟細(xì)胞密度有關(guān),細(xì)胞在各個(gè)時(shí)期的葉綠素含量是不同的,細(xì)胞密度也是不同的,680測(cè)出來就亂了。

參考文獻(xiàn):Interference by pigment in the estimation of microalgal biomass concentration by?optical density
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?如果做生長(zhǎng)曲線的話可以每天的同一時(shí)候取樣,也可以隔天取樣。??我們用1mL的藻液就夠了,?必要時(shí)候600微升都行,不能再少了。

 

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